[發明專利]一種藏藥組合物風濕塞隆制劑的質量檢測方法

有效

• 申請號: 201210523974.9
• 申請日: 2012-12-07
• 公開（公告）號: CN103852555A
• 公開（公告）日: 2014-06-11
• 發明（設計）人: 鄭亭亭;江玉娟;任松鵬;宋洋;單玉剛
• 申請（專利權）人: 山東阿如拉藥物研究開發有限公司
• 主分類號: G01N30/90
• 分類號: G01N30/90;G01N21/31;G01N30/02
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 趙龍群

1.一種原料藥組成為塞隆骨3.2重量份、訶子36.3重量份、紅花21.1重量份、豆蔻28.5重量份、巖精膏10.6重量份、印度獐牙菜10.6重量份、刀豆10.6重量份、山礬葉10.6重量份、藏茜草10.6重量份、紫草茸10.6重量份、刺柏10.6重量份、冰片3.2重量份、天竺黃10.6重量份、丁香4.2重量份、肉豆蔻6.3重量份、草果9.0重量份、沉香5.3重量份、白檀香9.5重量份、紫檀香6.1重量份、綠絨蒿6.1重量份、木棉花11.3重量份、木香9.5重量份、香旱芹9.5重量份、木香馬兜鈴5.3重量份、肉桂9.5重量份、螺厴6.1重量份、石斛6.1重量份、甘松8.2重量、石花14.7重量份、花苜蓿5.3重量份、毛訶子5.3重量份、余甘子6.3重量份的風濕塞隆制劑的質量檢測方法，其特征在于，該方法包括如下鑒別和/或含量測定中的一種或幾種：

鑒別：

（1）紫草茸的鑒別

取風濕塞隆固體制劑5～15g，加醋酸乙酯10～20mL，超聲處理20～40分鐘，濾過，濾液濃縮至1～2mL，作為供試品溶液；另取紫草茸對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各5～10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比4～6：4～6：0.5：1的二甲苯-二氯甲烷-丙酮-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，分別置日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點及熒光斑點；

（2）木香的鑒別

取風濕塞隆固體制劑2～5g，加二氯甲烷10～20mL，超聲處理20～40分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液；取木香對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各5～10μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比5～8：1～2的二氯甲烷-環己烷為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比為1％香草醛硫酸溶液，熱風吹至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

（3）刺柏的鑒別

取風濕塞隆固體制劑5～15g，加水50～150mL，按水蒸氣蒸餾法提取揮發油，揮發油作為供試品；取刺柏對照藥材0.5～1g，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各2～5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比7～9：3～1的石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比為1％硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

（4）藏茜草的鑒別

取風濕塞隆固體制劑5～10g，加甲醇10～20mL，超聲處理20～40分鐘，濾過，濾液濃縮至約1～2mL，作為供試品溶液；另取藏茜草藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各2～5μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比2～6:1～2的沸程為60～90℃石油醚-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；

（5）綠絨蒿的鑒別

取風濕塞隆固體制劑5～10g，加體積比1%鹽酸溶液20～30mL，超聲處理30～40分鐘，濾過，濾液用1%氫氧化鈉調堿至pH為10，再用二氯甲烷等體積萃取三次，合并二氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解約2mL，作為供試品溶液；另取綠絨蒿藥材1g，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB薄層色譜法進行試驗，吸取上兩種溶液各5μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比10～8：4～5：1的正己烷-乙酸乙酯-甲醇再滴加兩滴氨水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀溶液，日光下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；

（6）丁香的鑒別

取風濕塞隆固體制劑5～10g，加沸程為60-90℃石油醚50～80mL超聲，超聲處理30～40分鐘，濾過，濾液濃縮至1～2mL作為供試品溶液；另取丁香藥材1g，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比8～9:2～1的石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比為1％硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

（7）豆蔻的鑒別

取風濕塞隆固體制劑10～20g，加水80～100mL，按水蒸氣蒸餾法提取揮發油，揮發油作為供試品；取豆蔻對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB薄層色譜法進行試驗，吸取上述兩種溶液各2～3μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比8～9:2～1的石油醚-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比1％硫酸乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

含量測定

（1）總黃酮的含量測定

對照品溶液的制備：精密稱取蘆丁對照品10mg，置50mL量瓶中，加乙醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻，即得；

標準曲線的制備：精密量取上述對照品液0.0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL，分別置25mL量瓶中，編號為1至6號；各加水至5.0mL，加重量體積份數比5%亞硝酸鈉試液1mL，混勻，放置6分鐘，加重量體積份數比8-10%硝酸鋁溶液1mL，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10mL，再加水至刻度，搖勻，放置15-20分鐘，以1號為空白；照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅤA紫外-可見分光光度法進行試驗，在500nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，對照品濃度為橫坐標，繪制標準曲線；

測定法：取藏藥組合物風濕塞隆制劑細粉1g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液25mL置100mL量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液；精密量取供試品溶液4.0mL，置25mL量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“加水至5.0mL”起，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量（μg/mL），計算，即得；

本發明藏藥組合物風濕塞隆制劑中總黃酮的含量按蘆丁（C₂₇H₃₀O₁₆）計，不得少于25mg/g；

（2）印度獐牙菜的含量測定

照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥD高效液相色譜法進行測定；

色譜條件與系統適用性試驗：以十八烷其硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數比25：70-75的甲醇-體積份數比1%冰醋酸水溶液為流動相；檢測波長243nm；理論板數按獐牙菜苦苷峰計算應不低于2500；

對照品溶液的制備：取獐牙菜苦苷對照品適量，加乙醇制成每1mL含45μg的溶液，即得；

供試品溶液的制備：取藏藥組合物風濕塞隆制劑細粉約1g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入乙醇50mL，密塞，稱定重量，回流提取1小時，放冷，再稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液25mL，減壓濃縮至干，殘渣加水約20mL使溶解，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，減壓濃縮至干，殘渣加乙醇溶解并定容至5mL容量瓶中，搖勻，濾過，取續濾液，即得；

測定法：分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定，即得；

本發明藏藥組合物風濕塞隆制劑中印度獐牙菜的含量按獐牙菜苦苷（C₁₆H₂₂O₁₀）計，不得少于0.35mg/g；

（3）馬兜鈴酸A的檢查

照《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥD高效液相色譜法進行測定；

色譜條件與系統適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數比40-45:55-60的甲醇-體積份數比1%冰醋酸水溶液為流動相；檢測波長為315nm；理論板數按木香馬兜鈴酸峰計算應不低于3000；

對照品溶液的制備：取馬兜鈴酸A對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含500ng的溶液，即得；

供試品溶液的制備：取藏藥組合物風濕塞隆制劑細粉約10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液25mL，低溫濃縮至干，殘渣加質量體積份數比0.5%氫氧化鈉溶液20mL使其完全溶解并轉移至分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取2次，每次20mL，萃取后堿液使用體積份數比5%鹽酸調節pH?2～3，用乙酸乙酯萃取5次，每次20mL，合并乙酸乙酯萃取液，揮干，用甲醇溶解并轉移至1mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得；

測定法：分別吸取對照品溶液和供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，測定，即得；

本發明藏藥組合物風濕塞隆制劑中馬兜鈴酸A（C₁₇H₁₁NO₇）的含量不得高于10μg/g。