[發明專利]一種合成多肽及其制備方法和用途

無效

• 申請號: 201210521537.3
• 申請日: 2012-12-07
• 公開（公告）號: CN103848887A
• 公開（公告）日: 2014-06-11
• 發明（設計）人: 嚴潔;李軒
• 申請（專利權）人: 天津市漢康醫藥生物技術有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種合成多肽產品，具有以下氨基酸序列特征：H₂N-琥珀酰-L-丙氨酸-L-丙氨酸-L-苯丙氨酸-L-賴氨酸-L-脯氨酸-L-苯丙氨酸-OH。

2.根據權利要求1所述的多肽產品，是經過以下步驟制備而來：

（1）樹脂上載

將取代度約0.5?mmol/g?的2-Cl-Trt?樹脂4.36?g?置固相反應管中，以含5％?DIPEA?的DCM?溶液洗滌樹脂3?次，將Fmoc-Phe-OH(4.127?g，5.2?mmol)溶于DCM(35?ml)?中，?加入DIPEA(?2.615?ml，15?mmol)，全部溶解后加入樹脂中，室溫搖擺反應1.5?h，抽干后用DCM(30?ml)?洗滌樹脂3?次，加入DCM-MeOH-DIPEA(17∶2∶1)?混合液反應30?min?封閉未反應的樹脂，抽干后用DCM(30?ml×2)、DMF(30?ml×2)?交替洗滌3?次，最后用無水乙醚洗滌2?次后抽干，紅外干燥后得樹脂9.592?g，用UV-Fmoc?方法測得上載后的取代度為0.59mmol/g，上載產率為97.9％；

（2）微波輔助脫除Fmoc?保護基

將樹脂轉移至100?ml?微波反應管中，加入含20％哌啶的DMF?溶液30?ml，氮氣鼓泡，微波功率70?W，溫度40?℃，反應時間4min，之后抽除反應液，再加入含20％哌啶的DMF?溶液30?ml?以相同微波條件再反應1?次，抽除反應液后以DCM(30?ml×2)、DMF(30?ml×2)?交替洗滌3?次；

（3）微波輔助氨基酸縮合反應

Fmoc?保護氨基酸(10?mmol)、HATU(3.147g，10?mmol)?和HOOBt(1.391?g，10?mmol)?共同溶于DMF(30?ml)?中并加入DCM(5?ml)，冰水浴冷卻至5?℃，加入DIPEA(1.743?ml，10?mmol)?后混合均勻反應1?min，將該反應液加至脫除保護基后的樹脂中，通氮氣鼓泡混合，微波功率45?W，時間5?min，溫度50?℃，之后抽干反應液，以DCM(30?ml×2)、DMF(30?ml×2)?交替洗滌3?次，取少量樹脂以Kaiser方法檢測縮合情況，確認結果為陰性后脫除Fmoc?保護基；

（4）裂解樹脂制備H₂N-琥珀酰-L-丙氨酸-L-丙氨酸-L-苯丙氨酸-L-賴氨酸-L-脯氨酸-L-苯丙氨酸-OH

將完成所有縮合循環后的樹脂以DCM(30?ml×2)、DMF(30?ml×2)?交替洗滌2?次后轉至100?ml?茄形瓶中，以無水乙醚(30?ml×3)?洗滌，以帶有PP濾頭的聚四氟乙烯(PTFE)?管抽干后置于紅外燈下充分干燥；向樹脂中加入TFA-?苯甲硫醚-?苯甲醚(90?∶?5?∶?5)?(70?ml)，氬氣保護下攪拌反應2?h，完畢后過濾，濾液緩慢滴至冰無水乙醚(?2?L)?中，產生沉淀，離心(2?500×g)3?min，棄去上清液，沉淀再用無水乙醚攪拌-?離心-?棄上清重復操作5次，合并沉淀，置真空干燥箱中于40?℃避光干燥6h，得類白色固體(6.264?g，以樹脂計粗產率為89.7％?)。