[發明專利]一種防治自然流產的單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 201210521103.3
• 申請日: 2012-12-06
• 公開（公告）號: CN103044551A
• 公開（公告）日: 2013-04-17
• 發明（設計）人: 高玲娟;顧平清;宮輝;呂康泰;李秀玲
• 申請（專利權）人: 南京市婦幼保健院
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;A61K39/395;A61P15/06
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;劉成群

技術領域

本發明屬于醫藥領域，涉及一種防治自然流產的單克隆抗體及其應用。

背景技術

自然流產是妊娠早期常見的并發癥，發生率約占全部妊娠的15-20%。近年來，自然流產率在全球呈現了逐年上升的變化趨勢，引起國內外學者的深切關注。由于我國的人口基數大，其中育齡夫婦的數量尤為可觀，以2007年的統計數據為例，育齡婦女的人數約為3.61億，而在妊娠早期發生自然流產者遠遠超過100萬。因此深入研究女性自然流產發生的機制開始成為預防醫學領域疾病早期防治的一個熱點研究內容。

近年來研究顯示細胞凋亡在胚胎著床、胎盤的發育老化以及胎兒的生長發育中具有重要作用。各種原因所致的自然流產最終是以細胞凋亡實現的。目前，細胞凋亡在妊娠中的作用日益受到重視，越來越多的研究表明正常妊娠過程中胎盤、蛻膜的凋亡和增殖處于一種平衡狀態，一旦發生異常凋亡，平衡狀態被打破就可能導致病理妊娠，引發自然流產的發生。

gC1qR是補體C1q受體，由于日本學者發現gC1qR可介導單核細胞的凋亡，且能夠錨定在線粒體上影響單核細胞的功能，在多種細胞凋亡中發揮關鍵作用。C1q-gC1qR復合體在哺乳動物細胞的正常通訊中起抑制作用的觀點是近年來提出的新理論。近年來，單克隆抗體在疾病的診斷和治療預防方面特異性強，靈敏度高，顯示了非常明顯的優越特性。但是，目前尚沒有gC1qR單克隆抗體對自然流產有何種影響的報道，也沒有利用gC1qR單克隆抗體制備防治自然流產的藥物上市。

發明內容

本發明的目的是針對上述技術問題提供一種防治自然流產的單克隆抗體。

本發明還有一個目的是提供上述單克隆抗體在制備防治自然流產的藥物中的應用。

本發明的目的是通過下列技術措施實現的：

一種抗自然流產的單克隆抗體，該單克隆抗體為gC1qR單克隆抗體。優選該gC1qR單克隆抗體為美國Millipore公司貨號為AB2991的產品。

gC1qR單克隆抗體在制備防治自然流產藥物中的應用。

gC1qR單克隆抗體在制備抑制滋養層細胞凋亡的藥物中的應用。

本發明證明了gC1qR單克隆抗體具有防治自然流產的功能，可用于制備防治自然流產的藥物。以下是更為詳細的說明。

在我們實驗結果中顯示：自然流產患者其蛻膜組織中滋養層細胞凋亡明顯，且電鏡下有凋亡小體形成，而細胞膜、細胞器卻相對完整，呈現細胞凋亡的典型特征（見圖1、2）。

我們采用Western?blot技術對自然流產者蛻膜組織中gC1qR蛋白表達進行檢測，結果發現其gC1qR蛋白表達水平顯著上調（見圖3）。據此，我們提出科學問題：自然流產的機制由C1q-gC1qR復合體致線粒體功能損傷的機制介導，gC1qR基因在自然流產患者體內表達顯著上調可通過線粒體功能障礙的機制，導致滋養層細胞凋亡，最終引發流產。應用gC1qR單克隆抗體（gC1qR?monoclonalantibody,gC1qR?mAb）封閉gC1qR，使C1q和gC1qR的結合受阻，從而抑制了C1q-gC1qR復合體致線粒體功能損傷，減少了滋養層細胞的凋亡，有效降低自然流產的發生率。

我們以體外培養的胎盤滋養層細胞株HTR-8/SVneo為研究工具，探索gC1qR?mAb對滋養層細胞凋亡的影響。結果發現：①gC1qR?mAb干預滋養層細胞后，滋養層細胞凋亡顯著減少（見圖4）；②GFP-gC1qR?vector干預滋養層細胞后，電子顯微鏡下觀察發現細胞中線粒體數量減少，嵴斷裂、減少、消失，部分線粒體腫脹，甚至呈空泡狀；熒光定量PCR檢測發現細胞中線粒體拷貝數顯著減少，熒光探針H₂DCFDA（2',7'-Dichlorofluorescein?diacetate，2',7'-二氯熒光黃雙乙酸鹽）檢測發現細胞內活性氧ROS含量顯著升高（見圖5A-5C），而gC1qR?mAb組，上述滋養層細胞線粒體形態、數量、功能無顯著改變。

分析上述結果可見：①GFP-gC1qR?vector干預下發現滋養層細胞株HTR-8/SVneo中gC1qR蛋白表達量明顯上調的同時也獲得了線粒體形態、數量、功能變化的實驗結果；②gC1qR單克隆抗體干預不但抑制了滋養層細胞株HTR-8/SVneo的凋亡，而且線粒體功能受損顯著減少，進一步為gC1qR單克隆抗體防治自然流產發生的機制提供了支持依據。