[發明專利]雞傳染性支氣管炎弱毒株S1基因及其弱毒株和應用

有效

• 申請號: 201210519405.7
• 申請日: 2012-12-06
• 公開（公告）號: CN103849632B
• 公開（公告）日: 2017-05-17
• 發明（設計）人: 張許科;孫進忠;白朝勇
• 申請（專利權）人: 普萊柯生物工程股份有限公司
• 主分類號: C12N15/50
• 分類號: C12N15/50;C12N7/00;A61K39/215;A61P31/14;A61P11/00;A61K49/00;C12R1/93
• 代理公司: 北京聿宏知識產權代理有限公司11372
• 代理人: 吳大建,劉華聯

技術領域

本發明屬于禽類生物制藥技術領域，涉及一種雞傳染性支氣管炎弱毒株S1基因、含有該弱毒株S1基因的雞傳染性支氣管炎弱毒株及該弱毒株在制備疫苗方面的應用。

背景技術

雞傳染性支氣管炎(Avian infectious bronchitis，IB)是雞的一種急性，高度接觸傳染性的病毒性疾病。我國從1953年開始有呼吸道病變型IB的發病報道，1982年在廣東首次發現腎病變型IB，近年來全國各地均有IB的流行，其中多以腎病變型為主。自1995年以來我國江蘇、山東、山西、安徽等省發生了一種以生長阻滯、極度消瘦、拉稀為主要癥狀，以腺胃腫大為主要病理特征的腺胃病變型IB。該病發病率為30％～50％，病死率達30％以上。患病雞體重出現負增長，飼料報酬顯著下降，給養禽業造成重大損失。

王玉東等于1997年對腺胃型傳染性支氣管炎做了如下報道：1996年9月以來在青島及附近地區養雞場25～70日齡育成雞連續發生了一種以流淚、眼腫、伴有呼吸道癥狀，極度消瘦、拉稀、死亡為特征的傳染病，主要剖檢癥狀為：腺胃腫大如球狀，腺胃壁增厚，腺胃粘膜出血潰瘍，胰腺腫大出血。發病率可達100％，死亡率為3％～95％不等。不同品種雞都有發病。研究表明，病原為冠狀病毒，我們將該病暫定名為雞腺胃型傳染性支氣管炎。

免疫接種是防治雞傳染性支氣管炎病毒的最有效手段。目前，市場上已經有一些弱毒疫苗在臨床上應用，也有一些新的毒株被分離。由于IBV血清型眾多，且流行毒株與疫苗株相比在基因水平上存在較大變異，致使已有疫苗株不能夠有效防制IB流行毒株攻擊，IB的防制效果并不理想。例如，中國專利CN 101514334A公開了一種雞傳染性支氣管炎病毒弱毒疫苗株及其應用；中國專利CN 102220287A公開了一種雞傳染性支氣管炎冷適應致弱疫苗株及其應用；中國專利CN101100656A公開了一種雞腎型傳染性支氣管炎HN99株病毒株。以上專利均涉及到一些新的雞傳染性支氣管炎弱毒疫苗株，可用于制備活疫苗，但這些毒株均未表明可以對腺胃型雞傳染性支氣管炎病毒有良好的保護作用。

因此，目前存在的問題是需要研究開發一種可以能夠有效防制IB流行毒株攻擊，對腺胃型傳支具有較好保護力的疫苗。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對現有技術的不足，提供一種雞傳染性支氣管炎弱毒株S1基因，該弱毒株S1基因編碼的多肽能夠刺激機體產生中和抗體。

本發明還進一步提供了一種含有該S1基因的弱毒株，該弱毒株可用于制備抗雞傳染性支氣管炎疫苗組合物，能夠有效防止腺胃型傳支病毒的攻擊，對腺胃型傳染性支氣管炎具有較好保護力。

本發明還提供了一種雞傳染性支氣管炎弱毒株制得的亞單位疫苗。

特別地，本發明提供了一種由本發明的雞傳染性支氣管炎弱毒株制得的雞傳染性支氣管炎診斷藥劑。

本發明還進一步提供了一種與本發明的雞傳染性支氣管炎弱毒株S1基因同源的雞傳染性支氣管炎強毒株S1基因及含有該強毒株S1基因的雞傳染性支氣管炎強毒株，該強毒株可用于抗傳染性支氣管炎疫苗或亞單位疫苗或疫苗組合物的效力檢驗。

為此，本發明提供了一種雞傳染性支氣管炎弱毒株S1基因，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。

本發明中雞傳染性支氣管炎弱毒株S1基因是病毒在演化過程中最容易發生變異的基因，其編碼的多肽能夠刺激機體產生中和抗體，且其高變區主要位于S1基因內。通過對本發明中雞傳染性支氣管炎弱毒株S1基因序列進行分析，發現了雞傳染性支氣管炎弱毒株S1基因的序列總長度為1562bp。

在本發明的一個具體的實施例中，對雞傳染性支氣管炎弱毒株S1基因進行分離純化。先從雞傳染性支氣管炎弱毒株病毒液中提取核酸，并以此為模板，經反轉錄后，用特異性引物進行PCR擴增，之后用PCR產物純化試劑盒回收目的片段，即獲得純化的雞傳染性支氣管炎弱毒株S1基因。