[發明專利]用于診斷癌癥的生物標志物以及使用該生物標志物分離癌細胞的方法

無效

• 申請號: 201210517376.0
• 申請日: 2012-12-05
• 公開（公告）號: CN103197076A
• 公開（公告）日: 2013-07-10
• 發明（設計）人: 金淵正;金俞善;李錠建;白相鉉;吳真美;鄭孝英
• 申請（專利權）人: 三星電子株式會社;亞洲大學校產學協力團
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;C12N5/09;C12N5/095
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 金擬粲

相關申請的交叉引用

本申請要求2012年1月10日向韓國知識產權局提交的韓國專利申請No.10-2012-0003081的優先權，在此將其全部公開內容引用作為參考。?

技術領域

本文涉及多種用于檢測癌癥干細胞或經歷了上皮-間充質轉換(epithelial-mesenchymal?transition,EMT)的循環癌細胞的生物標志物，用于檢測癌癥干細胞或經歷了上皮-間充質轉換的循環癌細胞的試劑盒，所述試劑盒包括生物標志物，用其診斷癌癥的方法，以及分離癌癥干細胞或經歷了上皮-間充質轉換的循環癌細胞的方法。?

背景技術

在具有實體癌的患者中出現的腫瘤轉移是涉及單個腫瘤細胞的釋放和這些細胞經由血管轉移至身體其他部位的過程，是癌癥引起死亡的主要原因。目前，通常使用活組織檢測(在轉移的早期階段將組織的一部分取出并進行分析的方法)來診斷癌癥。但是，該方法的缺點是不易確定準確的活檢位點。另一方面，目前備受關注的液體活組織檢測是僅收集血液樣品并檢測血液中腫瘤細胞的方法。該方法的優點在于確定癌癥進展和治療，以及在早期階段檢測和診斷癌癥。?

隨著對能快速確定轉移癌病人治療結果和靈敏反映藥效的檢測方法的強烈需求，對因腫瘤浸潤而出現在癌癥患者血流中的循環腫瘤細胞(CTC)、以及患者其它器官中出現了但未被臨床發現的播散型腫瘤細胞(disseminatedtumor?cell,DTC)的檢測越來越受到關注。CTC是出現在血液中、并因此在機體中循環和在腫瘤轉移中發揮關鍵作用的罕見腫瘤細胞。相應地，檢測血液中的腫瘤細胞仍是癌癥診斷和治療中重要的課題。?

目前，作為抗癌治療的方法，在所有未經確認CTC或DTC存在與否的?病例中，都對大多數患者給藥抗癌藥物。因此，對于根據經檢測和分析CTC而確定的CTC的存在與否來選擇性給予抗癌藥物，或者對于根據CTC的分子性質來進行個性化給藥以改進抗癌藥物的效力，都有需求。?

已知CTC涉及癌癥的轉移和復發。尤其是，已有人提出，CTC很可能包含癌癥干細胞，后者是近期癌癥研究的最重要的主題。因此，人們希望有通過分析CTC來預測現有活檢方法無法預測的癌癥預后的新可能性，并希望有基于它來開發個性化治療方案的可能性。?

但是，CTC在血液中的含量非常少且不穩定，故很難檢測CTC和對其進行計數。因此，仍需要開發能檢測患者機體中CTC、癌細胞或癌癥干細胞的高度敏感的診斷方法，以及有效分離生物樣品中所含CTC的方法，以及有關的設備。?

發明概述

本發明提供了用于檢測癌癥干細胞或經歷了上皮-間充質轉換的循環癌細胞的生物標志物，該生物標志物包括窖蛋白(Caveolin)-1。?

本發明提供了用于檢測癌癥干細胞或經歷了上皮-間充質轉換的循環癌細胞的試劑盒，該試劑盒包括特異性結合窖蛋白-1的抗體，或其片段或其抗原結合片段。?

本發明提供了用于從生物樣品中檢測窖蛋白-1以提供癌癥診斷所需的信息的方法。?

本發明提供了用窖蛋白-1作為生物標志物來分離癌癥干細胞或經歷了上皮-間充質轉換的循環癌細胞的方法。?

附圖說明

通過后文對實施方案的描述，并結合附圖，本發明的這些和/或其他方面將更為明顯和更容易理解：?

圖1示出了根據本發明一實施方式的western印跡結果，其顯示九種癌細胞系中窖蛋白-1的表達水平；?

圖2A~2C的圖是顯示根據本發明多個實施方式的免疫細胞化學和western印跡結果，它們表明，在MCF7細胞系中誘導了上皮-間充質轉換，其中，球形表示上皮-間充質轉換-誘導的細胞；?

圖3的圖顯示根據本發明一實施方式的比較結果：其比較了具有窖蛋白-1抗體的珠與經歷了上皮細胞-間充質轉化的MCF-7細胞結合的結合親和力、和這些珠與正常癌細胞結合的結合親和力；以及?

圖4的圖顯示根據本發明實施方式的western印跡結果，確認窖蛋白-1、蝸牛蛋白(Snail)、ALDH1、CD133和CD44在上皮-間充質轉換-誘導的MCF7細胞中的表達水平。?

發明詳述