[發明專利]一種用于治療糖尿病的干細胞制劑及其制備方法

在審

• 申請號: 201210517298.4
• 申請日: 2012-12-05
• 公開（公告）號: CN103845362A
• 公開（公告）日: 2014-06-11
• 發明（設計）人: 劉勇;陳彥田;齊瀚實
• 申請（專利權）人: 上海坤愛生物科技有限公司
• 主分類號: A61K35/44
• 分類號: A61K35/44;A61K35/407;A61K35/39;A61K35/12;A61P3/10;C12N5/074;C12N5/071
• 代理公司: 上海集信知識產權代理有限公司 31254
• 代理人: 周成

1.一種用于治療糖尿病的干細胞制劑，包含：

a.從人體血液或組織器官中分離提取的干細胞和/或由所述干細胞誘導分化而來的胰島樣細胞，細胞含量為1×10⁵-5×10⁷個/ml；及

b.含0.5%肝素鈣的細胞保存液。

2.如權利要求1所述的干細胞制劑，其中所述人體血液或組織器官選自人體的臍帶、臍帶血、月經血、骨髓、牙齒、脂肪組織、胰腺和肝臟。

3.如權利要求1所述的干細胞制劑，其中所述干細胞是在分離提取后進一步經體外培養的干細胞。

4.如權利要求1所述的干細胞制劑，其中所述干細胞呈纖維樣貼壁生長，該細胞群表達CD44、CD90、CD29、CD73，不表達或低表達CD34、CD45、HLA-DR。

5.如權利要求1所述的干細胞制劑，其中所述細胞保存液由生理鹽水或無菌PBS溶液配制而成。

6.一種如權利要求1所述用于治療糖尿病的干細胞制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）干細胞的分離純化；

（2）干細胞體外培養，或干細胞體外誘導分化成胰島樣細胞；

（3）將步驟（2）獲得的細胞用保存液稀釋，制成干細胞制劑；

（4）干細胞制劑的質量檢測。

7.如權利要求6所述的制備方法，其中所述干細胞的分離純化和體外培養包括以下步驟：將檢測合格的人體血液或剪碎的組織器官用膠原酶消化為單細胞懸液，加入含有胎牛血清的α-MEM培養基或DMEM培養基終止消化，離心分離除去上清，加培養基重懸，將細胞懸液接種在含有胎牛血清的α-MEM培養基或DMEM培養基的培養瓶或培養板中，待成纖維狀細胞達到60-80%融合時，進行胰酶消化、傳代、再培養。

8.如權利要求6所述的制備方法，其中所述干細胞體外誘導分化成胰島樣細胞包括以下步驟：取人干細胞經復蘇后，按1×10⁶個細胞加入1-3ml誘導培養基：α-MEM培養基或DMEM培養基，內含15%-20%血清替代品、1%非必需氨基酸、1mmol/L谷氨酰胺、4-6μg/L重組人堿性纖維母細胞生長因子、5-10mmol/L尼克酰胺；置于培養箱中培養；每2-3天更換培養基，培養時間2-3周。

9.如權利要求6所述的制備方法，其中所述干細胞制劑的質量檢測包括細菌、真菌、支原體、病毒、內毒素、熱源檢測及細胞活性檢測。