[發明專利]一種泰樂菌素產生菌、遺傳改造方法及其應用

有效

• 申請號: 201210517193.9
• 申請日: 2012-12-05
• 公開（公告）號: CN103849591B
• 公開（公告）日: 2017-07-07
• 發明（設計）人: 劉文;趙群飛;張華;董坤;彭欣;李慧芬
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海有機化學研究所;山東魯抗舍里樂藥業有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P19/62;C12N15/76;C12R1/54
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司31266
• 代理人: 祝蓮君,雷芳

1.一種泰樂菌素產生菌，其特征在于，所述的產生菌的發酵產物中，泰樂菌素B(Tb)的相對含量滿足下式：

B/(A+B)≥95％

式中，

B為發酵產物中泰樂菌素B(Tb)的質量；

A為發酵產物中泰樂菌素A(Ta)的質量；

所述產生菌的基因組中碳霉糖合成基因簇被失活或敲除；

其中，所述泰樂菌素產生菌是弗氏鏈霉菌(Streptomyces fradiae)；和

所述碳霉糖合成基因簇包含基因tylCVII、tylCV、tylCIII、tylCIV和tylCII。

2.如權利要求1所述的泰樂菌素產生菌，其特征在于，所述泰樂菌素產生菌為弗氏鏈霉菌(Streptomyces fradiae)SWL00020，保藏編號為：CGMCCNo.6717。

3.如權利要求1所述的泰樂菌素產生菌，其特征在于，所述產生菌中缺失以下5種基因：tylCVII、tylCV、tylCIII、tylCIV和tylCII。

4.如權利要求1所述的泰樂菌素產生菌，其特征在于，所述產生菌不表達以下5種基因：tylCVII、tylCV、tylCIII、tylCIV及tylCII。

5.一種權利要求1所述的泰樂菌素產生菌的用途，其特征在于，它被用做發酵生產泰樂菌素B(Tb)的工程菌株。

6.一種生產泰樂菌素B(Tb)的方法，其特征在于，包括步驟：

(a)培養權利要求1所述的泰樂菌素產生菌，從而產生含有泰樂菌素B的發酵產物；和

(b)從發酵產物中分離出泰樂菌素B(Tb)。

7.一種生產替米考星的方法，其特征在于，

(a)培養權利要求1所述的泰樂菌素產生菌，從而產生含有泰樂菌素B(Tb)的發酵產物；

(b)從發酵產物中分離出泰樂菌素B(Tb)；和

(c)將分離出的泰樂菌素B(Tb)轉化為替米考星。

8.一種制備泰樂菌素產生菌的方法，其特征在于，包括步驟：

(1)構建用于同源重組的載體，所述的載體依次含有以下元件：碳霉糖合成基因簇上游同源臂序列，連接序列，和碳霉糖合成基因簇下游的同源臂序列；

(2)將步驟(1)的所述載體導入出發菌株，獲得導入載體的菌株，其中所述的出發菌株可發酵產生泰樂菌素A(Ta)和泰樂菌素B(Tb)；

(3)從步驟(2)獲得的導入載體的菌株中，篩選所述上游同源臂序列和下游同源臂序列與出發菌株的基因組發生了二次同源重組的菌株，從而獲得泰樂菌素產生菌；

其中所述泰樂菌素產生菌是弗氏鏈霉菌(Streptomyces fradiae)；和

所述碳霉糖合成基因簇包含基因tylCVII、tylCV、tylCIII、tylCIV和tylCII。

9.一種用于同源重組的載體，其特征在于，所述載體依次含有以下元件：碳霉糖合成基因簇上游同源臂序列，連接序列，和碳霉糖合成基因簇下游的同源臂序列，且所述載體缺失碳霉糖合成基因簇；

其中，所述碳霉糖合成基因簇包含基因tylCVII、tylCV、tylCIII、tylCIV及tylCII。

10.如權利要求9所述的載體，其特征在于，所述碳霉糖合成基因簇的序列如SEQ ID NO：1所示。