[發明專利]一種卷煙煙氣凝集物毒理學生物測定方法

無效

• 申請號: 201210515247.8
• 申請日: 2012-12-05
• 公開（公告）號: CN103018431A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 雷東鋒;王一理;韓航航;鄧寶安;任軍林;王宗英;王科杰;王大鋒
• 申請（專利權）人: 陜西中煙工業有限責任公司
• 主分類號: G01N33/48
• 分類號: G01N33/48;G01N1/22;G01N1/28
• 代理公司: 西安新思維專利商標事務所有限公司 61114
• 代理人: 李罡

1.一種卷煙煙氣凝集物毒理學生物測定方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）煙氣粒相物的獲得：確定所要選用及需處理的樣品，在恒溫恒濕，即：20℃和60%相對濕度條件下平衡48h，通過德國Borgwaldt公司生產的?RM-?20型轉盤式20孔道吸煙機，在維持20℃和60%相對濕度條件下，在標準抽吸條件下，即：1?puff/?min?,?2?s/?puff?,?35?mL/?puff抽吸，煙氣通過?85?mm直徑的劍橋濾片收集；

2）煙氣粒相物的提取：將獲得的濾紙片取下密封保存，處理時，用剪刀剪碎，放入50?mL離心管中，加入二甲基亞砜以使其完全浸沒濾紙碎片，30℃下振蕩4hrs后,??30℃，5000rpm條件下離心，取上清液體，收集入離心管中4℃密封保存備用；

3）細胞增殖/細胞毒試驗：

細胞株：CCL-64?貂肺上皮細胞，細胞培養于DMEM完全培養基中，經時添加培養基并傳代，維持細胞在對數生長期，待用；

取培養至對數期的細胞株，調細胞濃度至1x105?/ml,?接種于96孔板，104/孔細胞，添加待試的TPM?20%?起始，對倍稀釋，37℃?培養48小時，加MTT，即儲存液2mg/ml，20μl/孔，繼續孵育4小時，?棄上清，加DMSO?150ul/孔，570nm/630nm?讀取光密度，分析結果，一般結果顯示，高濃度煙氣凝集物表現為直接的細胞毒效應，即OD值低于陰性對照，當待測樣品濃度降低時則表現為刺激細胞增殖，OD值高于陰性對照，以明顯刺激細胞增殖的最高稀釋度為觀察終點。