[發(fā)明專利]吸附劑、固相載體及精制方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210514765.8
• 申請(qǐng)日: 2012-12-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103130872A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 戸所正美;島谷明子
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 捷恩智株式會(huì)社
• 主分類號(hào): C07K7/06
• 分類號(hào): C07K7/06;C07K7/08;C07K14/00;C07K17/00;C07K14/745;C07K14/78;C07K14/705;C07K14/47;C07K1/14
• 代理公司: 北京同立鈞成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11205
• 代理人: 臧建明

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用于血液凝固因子(blood?coagulation?factor)或細(xì)胞粘附因子(cell?adhesion?factor)的吸附劑及精制方法。

背景技術(shù)

作為蛋白質(zhì)(protein)等生物分子的精制方法，一般已知有色譜法(Chromatography)，作為其具體例，有陽(yáng)離子交換色譜法(Cation?ExchangeChromatography)、陰離子交換色譜法(Anion?Exchange?Chromatography)、凝膠過(guò)濾色譜法(Gel?filtration?Chromatography)、疏水性作用色譜法(Hydrophobic?Interaction?Chromatography)、親和色譜法(AffinityChromatography)。由于通過(guò)組合這些方法可高度地精制對(duì)象蛋白質(zhì)，所以在對(duì)血液、血漿或細(xì)胞等的培養(yǎng)液中含有的例如成為生物醫(yī)藥品的紅細(xì)胞生成素或免疫球蛋白等的精制中，色譜法逐漸成為重要技術(shù)。尤其是親和色譜法重要的是如下方面：與其他方法相比，對(duì)于對(duì)象物質(zhì)的選擇性非常高，因此可通過(guò)1次操作高度地精制，而可憑借短操作時(shí)間獲得高生產(chǎn)性。

親和色譜法是利用與對(duì)象物質(zhì)具有相互作用的配位基(ligand)來(lái)進(jìn)行，有時(shí)進(jìn)行使用蛋白質(zhì)作為該配位基的精制。例如，已知有利用蛋白質(zhì)A固定化填充劑來(lái)精制免疫球蛋白(Immunoglobulin)而制造抗體醫(yī)藥，或者利用明膠(Gelatin)固定化填充劑來(lái)精制纖維連接蛋白(Fibronectin)等血液成分等。

雖然以蛋白質(zhì)作為配位基的親和色譜法能夠?qū)崿F(xiàn)高選擇性的效率良好的精制，但存在由如下原因引起配位基劣化的問(wèn)題：由堿洗引起的配位基的改性或分解、由蛋白質(zhì)分解酶引起的配位基的分解、或配位基本身的脆弱性。

另外，以蛋白質(zhì)作為配位基的親和色譜法存在其配位基材料中會(huì)混入來(lái)自動(dòng)物的材料的情況，也存在安全性問(wèn)題。即，近年來(lái)，基于對(duì)瘋牛病等人畜共通傳染病的擔(dān)憂，例如需要避免使用來(lái)自牛的明膠作為配位基，謀求一種代替來(lái)自動(dòng)物材料的配位基材料。

此外，以蛋白質(zhì)作為配位基的親和色譜法存在如下情況：由于配位基與對(duì)象物質(zhì)的高親和性，所以對(duì)象物質(zhì)的回收條件必須采用溫和條件。例如，在自所述的蛋白質(zhì)A固定化凝膠中洗脫出免疫球蛋白的情況下，需要酸性條件(例如pH值為3)，在自明膠固定化凝膠中洗脫出纖維連接蛋白的情況下，有時(shí)使用8M的尿素、1M的溴化鈉(NaBr)或精氨酸(Arginine)等(非專利文獻(xiàn)1)。在此種嚴(yán)格的洗脫條件的基礎(chǔ)上，對(duì)象物質(zhì)的蛋白質(zhì)改性的擔(dān)憂、或洗脫所使用的尿素或精氨酸等試劑為高濃度而耗費(fèi)成本成為問(wèn)題，或者洗脫步驟后需要進(jìn)行中和等處理而使成本或繁雜度成為問(wèn)題。

如此，在蛋白質(zhì)的精制中，業(yè)界尋求一種具有與對(duì)象物質(zhì)的高親和性與難劣化性，同時(shí)可在溫和條件下利用簡(jiǎn)便的程序，且廉價(jià)、安全地精制蛋白質(zhì)的親和配位基。

此處，作為生物分子而熟知的膠原蛋白(Collagen)是具有在相同方向上聚合3條包含Gly-X-Y(X、Y為各種氨基酸，X為Pro、Y為Hyp的情形居多)的重復(fù)結(jié)構(gòu)的多肽(Poly?peptide)所形成的三重螺旋結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)的統(tǒng)稱。

已知有天然膠原蛋白會(huì)與各種生物分子結(jié)合，或具有血小板聚集能力。目前為止，得知對(duì)于天然膠原蛋白中的特定氨基酸序列而言會(huì)結(jié)合特定的蛋白質(zhì)等分子(非專利文獻(xiàn)3)。利用此種知識(shí)見(jiàn)解，也對(duì)創(chuàng)造出一種與特定的對(duì)象分子結(jié)合的膠原蛋白樣肽進(jìn)行研究，例如揭示了與血管性血友病因子(von?Willebrand?Factor)等膠原蛋白結(jié)合分子結(jié)合的具有特定氨基酸序列的膠原蛋白樣肽(非專利文獻(xiàn)2)。

另外，作為以膠原蛋白樣肽的形式創(chuàng)造出的肽，存在具有Pro-X-Gly(X為Pro或Hyp)序列的重復(fù)結(jié)構(gòu)的多肽。得知該多肽具有血小板聚集能力(非專利文獻(xiàn)4)，并揭示有一種含有該多肽的血小板聚集引發(fā)物質(zhì)(專利文獻(xiàn)1)。然而，尚未知曉具有所述序列的重復(fù)結(jié)構(gòu)的多肽片段是以高親和性與纖維連接蛋白或血管性血友病因子等進(jìn)行結(jié)合。

[現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)]

[專利文獻(xiàn)]

專利文獻(xiàn)1：國(guó)際公開(kāi)第2008/075589號(hào)公報(bào)

[非專利文獻(xiàn)]

非專利文獻(xiàn)1：親和色譜原理和方法(通用電氣醫(yī)療說(shuō)明書(shū))第69頁(yè)(Affinity?Chromatography?Principles?and?Methods(Handbook?from?GEHealthcare)p.69)