[發明專利]一種香椿葉中沒食子酸及其甲酯的同時制備及檢測方法

有效

• 申請號: 201210513809.5
• 申請日: 2012-12-04
• 公開（公告）號: CN103058859A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 楊歡;劉丹;沈玉萍;余筱潔;周存山;夏國華;江曉萍
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C07C65/03
• 分類號: C07C65/03;C07C51/47;C07C69/88;C07C67/56;G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

1.一種香椿葉中沒食子酸及其甲酯的同時制備方法，其特征在于按照下述步驟進行：

????1）新鮮采摘的香椿葉置于通風處陰干，粉碎，得細粉，加入5～7倍量（g/mL）85～95%（v/v）乙醇，超聲提取，每次1～1.5小時，提取2～3次，合并提取液，50^oC以下減壓回收溶劑，得浸膏；

2）浸膏中加入6倍量（g/mL）水混懸，以等量水飽和正丁醇萃取3次，合并萃取液，減壓回收溶劑，得正丁醇萃取物；

3）正丁醇萃取物干法上樣載入硅膠柱進行分離，萃取物與硅膠質量比例為1:50～70；以二氯甲烷-甲醇-水-甲酸體積比例為100:10:1:0.3～100:15:3:3的混合溶液為洗脫劑，進行等度洗脫；以硅膠質量:流分體積為1:1～1.5（g/mL）收集一份流出液，收集第5～8份流分，合并，減壓回收溶劑，得初步純化物；

3）將初步純化物:甲醇以比例為1:30～50（g/mL）進行溶解，溶液載入制備型高效液相色譜儀進行分離，分別收集6min～9min和9min～12min兩個流份；將流份分別于50^oC以下減壓濃縮至干，得白色固體I和白色固體II，經過核磁共振氫譜和碳譜分析，并與文獻數據進行對照，確認白色固體I為沒食子酸，白色固體II為沒食子酸甲酯。

2.根據權利要求1所述的一種香椿葉中沒食子酸及其甲酯的同時制備方法，其特征在于其中步驟3）中的色譜條件為：流動相為甲醇-0.1%～0.2%三氟乙酸水溶液（v/v）體積比例為5%～15%:95%～85%等度洗脫；進樣量為4～5mL；流速為20～30mL/min；色譜柱填料為5μm的C₈或C₁₈反相鍵合硅膠；色譜柱尺寸為內徑15mm～30mm、長度150mm～250mm；紫外檢測波長為270nm。

3.一種香椿葉中沒食子酸及其甲酯的同時檢測方法，其特征在于按照下述步驟進行：

????（1）對照品溶液制備：

????將沒食子酸:沒食子酸甲酯:甲醇以比例為1:1:2.5（mg/mg/mL）溶解得對照品母液；以沒食子酸乙酯為內標物，按比例為1:2（mg/mL）溶于甲醇，得內標物母液；取適量對照品母液和內標物母液混合，加入甲醇將對照品母液稀釋至原濃度的1/2、1/5、1/10、1/20、1/50和1/100，將內標物母液稀釋至原濃度的1/20，得不同濃度的6份混合對照品工作溶液；另將內標物母液用甲醇稀釋到原濃度的1/20，得到含內標物的甲醇溶液；

????所述的沒食子酸、沒食子酸甲酯和沒食子酸乙酯的化學結構和分子量如下所示：

????（2）樣品溶液制備：

????精密稱取香椿葉粉末，加入含內標物的甲醇溶液，比例為1:20（g/mL），在600W，40kHz的超聲輔助提取45～60分鐘，冷卻至室溫，搖勻，混懸液通過0.45μm微孔濾器，收集續濾液；

????（3）高效液相色譜分析條件：

????流動相由A和B組成，其中A為乙腈，B為0.1%～0.2%乙酸水溶液（ν/ν）；流速為0.9?mL/min～1.0mL/min；色譜柱填料為5μm的C₈或C₁₈；色譜柱尺寸為內徑4.6mm、長度150mm～250mm；柱溫為30^oC～40^oC；進樣量為5～10μL；檢測波長為270nm；梯度洗脫程序以體積百分比計算為0min，A：3%～5%、B：97%～95%；18min，A：30%～35%、B：70%～65%。