[發(fā)明專利]一種采用生物提取法制備縮宮素溶液的生產(chǎn)工藝

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210512924.0
• 申請(qǐng)日: 2012-12-04
• 公開（公告）號(hào): CN102964429A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金榮富;陳靜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 安徽宏業(yè)藥業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): C07K7/16
• 分類號(hào): C07K7/16;C07K1/22
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵;馮瓊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種采用生物提取法制備縮宮素溶液的生產(chǎn)工藝。

背景技術(shù)

縮宮素（Oxytocin），又稱催產(chǎn)素，是一種由9個(gè)氨基酸殘基組成的、具有一個(gè)二硫鍵的、具有生物活性的多肽類產(chǎn)品，分子式C₄₃H₆₆N₁₂O₁₂S₂，分子量1007.2，等電點(diǎn)7.7，易溶于水，溶于丙酮、丁醇和稀醋酸，不溶于乙醚和石油醚，干品穩(wěn)定，pH3.5～4.4的酸性溶液中穩(wěn)定，堿性溶液中不穩(wěn)定。結(jié)構(gòu)式如下：

縮宮素多肽的N末端和C末端分別為半胱氨酸和甘氨酸，其間的七個(gè)氨基酸以肽鍵相連形成一級(jí)結(jié)構(gòu)，在此基礎(chǔ)上，由于氫鍵的形成，作用九肽間產(chǎn)生二級(jí)螺旋結(jié)構(gòu)；而N末端的半胱氨酸和第6位的半胱氨酸的S結(jié)合形成雙S鍵而形成一個(gè)內(nèi)環(huán)，加之疏水基團(tuán)，如9肽中的酪氨酸，亮氨酸和異亮氨酸等形成疏水鍵，使九肽中的極性基團(tuán)在內(nèi)部，而離子基團(tuán)在外部，使產(chǎn)品內(nèi)部排斥水相而形成緊密結(jié)構(gòu)的趨勢(shì)-β折疊，形成生物活性特定的空間結(jié)構(gòu)：活性中心。而縮宮素具有天然的雙S鍵和β-回折的結(jié)構(gòu)決定了縮宮素的生物活性。

縮宮素是一種哺乳動(dòng)物激素，于1895年被發(fā)現(xiàn)，主要由下丘腦視上核和室旁核的神經(jīng)分泌大細(xì)胞系統(tǒng)分泌產(chǎn)生，從垂體后葉釋放入血液，沿血液循環(huán)到達(dá)遠(yuǎn)端的器官發(fā)揮作用，在臨床上被廣泛用于引產(chǎn)、催產(chǎn)及預(yù)防因分娩后子宮乏力引起的大出血，是目前美國(guó)FDA唯一認(rèn)可用于臨床引產(chǎn)的藥物。縮宮素還能刺激乳腺的平滑肌收縮，有助于乳汁自乳房排出，但并不增加乳腺的乳汁分泌量。

縮宮素不僅可作為育齡婦女生育時(shí)催產(chǎn)使用，同時(shí)該產(chǎn)品在國(guó)際上也被廣泛應(yīng)用于動(dòng)、植物養(yǎng)殖方面，如用于動(dòng)物，不僅可提高動(dòng)物的受胎率及繁殖率，還可提高單位產(chǎn)奶量；用于果樹，則不僅可加強(qiáng)果物的優(yōu)異外觀，還能起到催熟的作用。

目前主要采用化學(xué)合成法制備縮宮素。我國(guó)自1969年第一次合成縮宮素以來，國(guó)內(nèi)30余家縮宮素制劑生產(chǎn)廠家均采用九肽酰胺經(jīng)鈉-液氨法消除、縮合的辦法合成縮宮素。然而合成的縮宮素粗品含有一些與縮宮素結(jié)構(gòu)類似的雜肽，例如氨基酸消旋化產(chǎn)生的非對(duì)映異構(gòu)體、部分氨基酸未連接上產(chǎn)生的缺失肽、肽鍵斷裂產(chǎn)生的斷裂肽以及氧化不徹底產(chǎn)生的還原態(tài)開環(huán)肽等，造成縮宮素產(chǎn)品收率較低，純化困難。而且采用化學(xué)合成法制備的縮宮素?zé)o法形成其天然的雙S鍵和β-回折的結(jié)構(gòu)，產(chǎn)品存在生物活性低的問題。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有制備方法的缺陷提供一種采用生物提取法制備縮宮素溶液的生產(chǎn)工藝。

為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種采用生物提取法制備縮宮素溶液的生產(chǎn)工藝，包括

步驟1：垂體后葉干粉加水提取，離心收集提取液；

步驟2：提取液經(jīng)含有0.25%冰醋酸水溶液（體積/體積）的層析柱分離收集層析液，其中所述層析柱的填料為人造沸石；

步驟3：層析液用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至3.5，加熱至100℃保溫3分鐘，立即冷卻后過濾收集濾液，濾液用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至3.5，加入皂土吸附，過濾收集濾液即得。

本發(fā)明所述生產(chǎn)工藝運(yùn)用獨(dú)特的生物制備工藝技術(shù)，采用水提取垂體后葉干粉中的縮宮素，然后利用人造沸石吸附除去垂體后葉干粉提取液中加壓素最后利用皂土除去小分子物質(zhì)、有機(jī)有色物和熱原，從而使制得縮宮素具有天然的雙S鍵和β-回折的結(jié)構(gòu)，提高了制得的縮宮素的溶液的生物活性。

其中，本發(fā)明所述垂體后葉干粉可以通過商業(yè)渠道從市場(chǎng)上購(gòu)買得到，也可由哺乳動(dòng)物小腦垂體后葉自行制備得到。在一個(gè)實(shí)施例中，所述垂體后葉干粉的制備方法為取哺乳動(dòng)物小腦置于丙酮中脫水后，分離垂體后葉，干燥后粉碎過40-60目篩得到。其中，所述哺乳動(dòng)物為豬、狗、牛、羊、馬中的一種。優(yōu)選為豬、羊。

本發(fā)明所述生產(chǎn)工藝首先采用水提取垂體后葉干粉以將其中的縮宮素分離。其中，步驟1所述加水提取優(yōu)選為加水提取四次，每次30分鐘，合并提取液。

進(jìn)一步的，作為優(yōu)選，步驟1所述加水提取的步驟中垂體后葉干粉與水的重量比為1:10-1:20。更優(yōu)選為1:12-1:16。

在本發(fā)明中，所述提取縮宮素的水可以為蒸餾水、去離子水、注射用水中的一種。優(yōu)選為注射用水。

在一個(gè)具體實(shí)施例中所述加水提取為稱后葉干粉，加入16倍注射用水，攪拌提取30分鐘，離心，收集液體，殘?jiān)俜謩e加入14倍、12倍、12倍注射用水按同法提取三次，合并四次離心液。