[發明專利]一種具有雙熒光基團的質粒及其作為標準品的應用

有效

• 申請號: 201210509946.1
• 申請日: 2012-12-03
• 公開（公告）號: CN102965385A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: 李奎;阮進學;李和剛;劉楠;吳添文;牟玉蓮;楊述林
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12Q1/68;C12Q1/66;C12Q1/34
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種質粒，包括表達盒甲和表達盒乙；所述表達盒甲包括啟動子甲、特異DNA片段甲和終止子甲；所述表達盒乙包括啟動子乙、特異DNA片段乙和終止子乙；

所述特異DNA片段乙為編碼序列表的序列3所示的hFluc蛋白的DNA分子；

所述特異DNA片段甲為如下（a）或（b）：

（a）自上游至下游依次包括如下元件：hRluc1片段、hRluc2片段、特異DNA片段丙、所述hRluc2片段和hRlu3片段；所述hRluc1片段、所述hRluc2片段和所述hRlu3片段順次連接后編碼序列表的序列4所示的hRluc蛋白；編碼所述hRluc蛋白的起始密碼子位于所述hRluc1片段上；編碼所述hRluc蛋白的終止密碼子位于所述hRlu3片段上；

（b）自上游至下游依次包括如下元件：hRluc-X片段、特異DNA片段丙、所述hRluc-X片段和hRluc-Y片段；所述hRluc-X片段和所述hRluc-Y片段順次連接后編碼序列表的序列4所示的hRluc蛋白；編碼所述hRluc蛋白的起始密碼子位于所述hRluc-X片段上；編碼所述hRluc蛋白的終止密碼子位于所述hRluc-Y片段上；

所述（a）和/或所述（b）中，所述特異DNA片段丙中具有終止所述特異DNA片段甲連續編碼的終止密碼子；所述特異DNA片段丙中具有多克隆位點。

2.如權利要求1所述的質粒，其特征在于：所述hRluc2片段由300-500個核苷酸組成。

3.如權利要求2所述的質粒，其特征在于：所述hRluc2片段如序列表的序列2自5’末端第993至1392位核苷酸所示；所述hRluc1片段如序列表的序列2自5’末端第694至992位核苷酸所示；所述hRlu3片段如序列表的序列2自5’末端第1908至2144位核苷酸所示。

4.如權利要求1至3中任一所述的質粒，其特征在于：所述特異DNA片段丙如序列表的序列1自5’末端第7至121位核苷酸所示。

5.如權利要求4所述的質粒，其特征在于：所述特異DNA片段甲如序列表的序列2自5’末端第694至2144位核苷酸所示。

6.如權利要求1至5中任一所述的質粒，其特征在于：所述啟動子甲為SV40早期增強子-啟動子；所述終止子甲為Synthetic?poly(A)。

7.如權利要求1至6中任一所述的質粒，其特征在于：所述所述特異DNA片段乙如序列表的序列2自5’末端第3047至4699位核苷酸所示。

8.如權利要求1至7中任一所述的質粒，其特征在于：所述啟動子乙為單純皰疹病毒胸苷激酶啟動子；所述終止子乙為SV40late?poly(A)。

9.如權利要求1至8中任一所述的質粒，其特征在于：所述質粒還包括抗性篩選基因。

10.權利要求1至9中任一所述的質粒在鑒定TALENs的敲除效率中的應用。