[發(fā)明專利]具底物特異性的N-?；呓z氨酸內(nèi)酯酶QsdA-RH5及其編碼基因與應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210509445.3
• 申請(qǐng)日: 2012-12-03
• 公開（公告）號(hào): CN102965357A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周志剛;張美超;楊雅麟;徐俐;李青;姚斌;于會(huì)民;何夙旭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所
• 主分類號(hào): C12N9/18
• 分類號(hào): C12N9/18;C12N15/55;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/21;C12N15/11;C12P13/06;C12R1/19;C12R1/01
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種具底物特異性的N-酰基高絲氨酸內(nèi)酯酶QsdA-RH5及其編碼基因與應(yīng)用。

背景技術(shù)

1994年Fuqua等人首次發(fā)現(xiàn)微生物群體在生長(zhǎng)過程中,因群體密度增加，其生理生化特性發(fā)生變化，出現(xiàn)少量菌體或單個(gè)菌體所不具備的一些特征。種群密度達(dá)到閾值時(shí)，所分泌的自誘導(dǎo)信號(hào)分子(autoinducers,AI)也達(dá)到一定濃度。AI與受體結(jié)合后，通過信號(hào)傳導(dǎo)而影響特定基因表達(dá)，調(diào)控群體生理特征，這就是所謂的群體感應(yīng)(quorum-sensing,QS)。

隨著病原菌耐藥性特別是多重耐藥性的日益嚴(yán)重，抗菌藥作用新靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)和新型抗菌藥物的研發(fā)顯得尤為重要。眾多病原菌的致病基因受到QS的調(diào)控，包括毒力因子、黏附因子以及介導(dǎo)病原菌抵抗宿主免疫和藥物的相關(guān)基因。

在眾多的AI中研究最為深入的是調(diào)控革蘭氏陰性群體感應(yīng)的信號(hào)分子?；呓z氨酸內(nèi)酯（AHL）。迄今發(fā)現(xiàn)的?；呓z氨酸內(nèi)酯降解酶有兩大類，一類是?；呓z氨酸內(nèi)酯酶,一類是酰基高絲氨酸酰基轉(zhuǎn)移酶。而紅球菌中產(chǎn)生的一種氧化還原酶（QsdA）是一類具有酰基高絲氨酸內(nèi)酯酶活性的淬滅酶。

目前已報(bào)道的N-酰基高絲氨酸內(nèi)酯酶，底物特異性較為廣泛，缺乏底物專一性，這使得在應(yīng)用時(shí)對(duì)沒有致病性的菌種的正常調(diào)控受到影響。因此，發(fā)掘?qū)Ｒ恍詮?qiáng)，針對(duì)性強(qiáng)的新N-?；呓z氨酸內(nèi)酯酶，具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種具底物特異性的N-?；呓z氨酸內(nèi)酯酶QsdA-RH5及其編碼基因與應(yīng)用。

本發(fā)明所提供的QsdA-RH5蛋白來自紅平紅球菌（Rhodococcus?erythropolis），具有N-?；呓z氨酸內(nèi)酯酶功能，為如下（a）或（b）的蛋白質(zhì)：

（a）由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；

（b）將序列1的氨基酸序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有N-酰基高絲氨酸內(nèi)酯酶功能的由序列表序列1衍生的蛋白質(zhì)。

為了使（a）或（b）中的QsdA-RH5蛋白便于純化，可在由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)的氨基末端或羧基末端連接上如表1所示的標(biāo)簽。

表1標(biāo)簽的序列

??標(biāo)簽?殘基數(shù)??序列??Poly-Arg?5-6（通常為5個(gè)）??RRRRR??Poly-His?2-10（通常為6個(gè)）??HHHHHH??FLAG?8??DYKDDDDK??Strep-tag?II?8??WSHPQFEK??c-myc?10??EQKLISEEDL