[發明專利]與大豆抗疫霉根腐病候選基因RpsWD15-1共分離的分子標記及其應用

無效

• 申請號: 201210509161.4
• 申請日: 2012-11-23
• 公開（公告）號: CN102994498A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 朱振東;張吉清;王曉鳴;夏長劍;段燦星
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院作物科學研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68;A01H1/04
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

技術領域

本發明屬于農業生物技術工程和農作物抗病遺傳育種領域，具體地說，涉及一種與大豆抗疫霉根腐病候選基因RpsWD15-1共分離的分子標記及其應用。?

背景技術

由大豆疫霉（Phytophthora?sojae?Kaμfmann?&?Gerdemann）引起的大豆疫霉根腐病是危害大豆生產的主要病害之一。近年來，該病害在大豆主產區黑龍江省危害日益突出，危害大豆面積達15×10⁴公頃。該病害可在大豆的任何生育階段造成危害，一般田塊減產10-30%，嚴重地塊可達60-90%，甚至造成絕產，對大豆生產造成嚴重威脅。目前，大豆疫霉根腐病已經成為威脅我國大豆生產的常見病害，所以對該病害的防治刻不容緩。?

實踐證明，培育和種植抗病品種是最為安全、經濟和有效的措施。為此，許多學者在篩選抗性資源及抗病基因定位方面做了大量的研究。研究表明，大豆對疫霉根腐病的抗性分為質量性狀抗性（小種抗性）和數量性狀抗性。質量性狀抗性由顯性基因控制，具有完全抗性。迄今，國外已在大豆基因組9個位點上鑒定了15個抗大豆疫霉根腐病基因（Rps），即Rps1a，Rps1b，Rps1c，Rps1d，Rps1k，Rps2，Rps3a，Rps3b，Rps3c，Rps4，Rps5，Rps6，Rps7，Rps8和theRps?gene?in?cv.Waseshiroge，分別位于大豆基因組第3,16,13,18,18,18,3,13和3號染色體上（MLG?N,J,F,G，G，G，N,F和N）（Sugimoto等，2012）。大豆疫霉根腐病在我國發生的歷史較短，抗病育種工作也剛剛起步。目前，我國只鑒定了4個抗病基因RpsYB30,RpsYD25,RpsZS18，RpsSN10分別?位于大豆基因組第19,3,2和13號染色體上（MLG?L,N,D1b和F）（范愛穎等，2009，孫石等，2011，姚海燕等，2010，于安亮等，2010，朱振東等，2007）。?

我國大豆疫霉具有群體結構復雜，適應范圍廣和毒力變化快等特點，容易產生新的毒力型小種和克服品種抗性。一般認為大豆疫霉根腐病基因的使用壽命為10-15年，但是新的抗病基因被克服的速度正在加快，如Rps8被鑒定后不到3年，就已發現了能夠克服其抗性的新的毒力型的大豆疫霉菌株。大量研究表明國外已鑒定的15個抗病基因中（除the?Rps?gene?in?cv.Waseshiroge外），除Rps1c和Rps1k外，都不能有效抵抗我國病區的大豆疫霉種群。因此，有必要大力挖掘和利用新的抗性資源并不斷地進行抗病基因的累加，培育抗性持久的大豆品種。?

為挖掘新的大豆抗性資源，大多數學者借助SSR分子標記(http://soybase.org)進行抗病基因定位和分子標記輔助選擇育種。該類標記具有高信息量、可靠性強、簡便和快速等優點，得到廣泛的應用。此外利用已公布的大豆基因組序列（http://www.Phytozome.net）開發相應的分子標記，可以對基因進行精細定位，獲得基因緊密連鎖的分子標記。?

大豆品種皖豆15是安徽省潘村湖農場農科所用蒙慶13經輻射后系統選育而成的，于1996年通過安徽省品質審定。該品種對大豆病毒病和霜霉病具有高抗性（李俊山2007）。前期研究結果表明，該品種對不同毒力型的兩個大豆疫霉菌株PsMC1和PsMC2均有較強的抗性（朱振東等，2001）。陳曉玲等（2008）和夏長劍等（2011）再次報道皖豆15對大豆疫霉菌株具有廣譜抗性，推測其可能含有新的抗病基因。?

發明內容

本發明的目的是提供一種與大豆抗疫霉根腐病候選基因?RpsWD15-1共分離的分子標記及其應用。?

為了實現本發明目的，本發明的一種與大豆抗疫霉根腐病候選基因RpsWD15-1共分離的分子標記，其中，所述候選基因RpsWD15-1位于大豆第17號染色體上，且位于標記Sattwd15-24/25和Sattwd15-47之間，與這兩個標記的遺傳距離分別為0.5cM和0.8cM。?

所述分子標記為Sattwd15-28，含重復基序(AT)₂₃，且用于擴增分子標記Sattwd15-28的PCR引物對為：?

上游引物F：5′-GCTTCCTATCACTCTTTGCTG-3′和?

下游引物R：5′-TTAGGCTAATGATGCTG-3′。?

分子標記Sattwd15-28與候選基因RpsWD15-1的遺傳距離為0cM。?