[發(fā)明專利]酶法催化合成α-熊果苷的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210508199.X
• 申請(qǐng)日: 2012-12-03
• 公開（公告）號(hào): CN102978265A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韋慧芳;羅生芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 韋慧芳;羅生芳
• 主分類號(hào): C12P19/44
• 分類號(hào): C12P19/44;C12R1/64
• 代理公司: 廣西南寧匯博專利代理有限公司 45114
• 代理人: 鄧曉安

1.一種酶法催化合成α-熊果苷的方法，其特征在于，包括如下步驟：

????（1）斜面種子培養(yǎng)：是取野油菜黃單胞菌（Xanthomonas?campestris）CGMCC?NO.1243菌種，接種于斜面培養(yǎng)基，置于30℃~35℃下培養(yǎng)24~36小時(shí)；所述斜面培養(yǎng)基的組成質(zhì)量濃度百分比如下：4%~6%蔗糖，0.5%蛋白胨，0.5%酵母膏，0.5%氯化鈉，0.1%~0.15%磷酸氫二鉀和2%瓊脂，其pH值為7.0-7.8；

（2）液體菌種培養(yǎng)：用接種環(huán)挑取一環(huán)菌種，接種于裝有50mL基本發(fā)酵培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，置30℃~35℃搖床上，以150r/min~200r/min振蕩培養(yǎng)24~36小時(shí)，得到種子培養(yǎng)液；

（3）將種子培養(yǎng)液，按接種量5%-10%，加入裝有200mL基本發(fā)酵培養(yǎng)基的500mL三角瓶中，置30℃~35℃，以150r/min~200r/min振蕩培養(yǎng)24-48小時(shí)后，冷凍，于6000~8000r/min下離心20~25min，收集菌體；用PBS緩沖液洗滌菌體2~3次，低溫超聲破碎，于6000~8000r/min下離心20~25min，取上清液，即為胞內(nèi)粗酶液；

（4）?向胞內(nèi)粗酶液加入蔗糖和對(duì)苯二酚，于160?r/min~180r/min、35~40℃下反應(yīng)36~48小時(shí)后，將反應(yīng)產(chǎn)物分離純化，即得α-熊果苷；所述蔗糖和對(duì)苯二酚加入的摩爾比為1∶30。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法催化合成α-熊果苷的方法，其特征在于：所述基本發(fā)酵培養(yǎng)基的組成質(zhì)量濃度百分比如下：4%~6%蔗糖，0.5%蛋白胨，0.3%牛肉膏，0.1%酵母膏，0.5%~1.0%硫酸鎂和2%碳酸鈣，其pH值為7.0-7.8。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的酶法催化合成α-熊果苷的方法，其特征在于：所述步驟（4）對(duì)苯二酚濃度為40?mmol/L，蔗糖濃度為150~180mmol/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的酶法催化合成α-熊果苷的方法，其特征在于：所述反應(yīng)產(chǎn)物分離純化，是將反應(yīng)產(chǎn)物置于大孔吸附樹脂柱AB-8中靜止吸附1.5~2h。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的酶法催化合成α-熊果苷的方法，其特征在于：所述反應(yīng)產(chǎn)物和大孔吸附樹脂柱AB-8的加入比為1ml∶1~2g。