[發(fā)明專利]一種人類PMSCS體外免疫調(diào)控淋巴細(xì)胞分子機(jī)制的檢測(cè)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210506446.2
• 申請(qǐng)日: 2012-12-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103018457A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-04-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐杰;房文峰;朱愛(ài)華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吳衛(wèi)江
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N21/64;G01N23/00
• 代理公司: 常州市維益專利事務(wù)所 32211
• 代理人: 何學(xué)成

1.一種人類PMSCS體外免疫抑制作用分子機(jī)制的檢測(cè)方法，其包括下述步驟：?

S1：PMSCS分離培養(yǎng)與鑒定；?

S2：免疫熒光染色法檢測(cè)PMSCS中PD-L1表達(dá)；?

S3：PD-L1mAb阻斷PMSCS對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用檢測(cè)；?

S4：PMSCS與T細(xì)胞體外共培養(yǎng)及PD-L1阻斷實(shí)驗(yàn)；?

S5：T細(xì)胞活性早期標(biāo)志CD69的檢測(cè)；?

S6：PMSCS對(duì)活化T細(xì)胞周期影響的檢測(cè)；?

S7：PMSCS對(duì)活化T細(xì)胞細(xì)胞因子分泌影響的檢測(cè)。?

2.如權(quán)利要求1所述的一種人類PMSCS體外免疫抑制作用分子機(jī)制的檢測(cè)方法，其中所述步驟1PMSCS的分離及培養(yǎng)過(guò)程如下：取足月破腹產(chǎn)胎兒的胎盤(pán)，取胎兒面的蛻膜組織，機(jī)械分散后用膠原酶消化，100目篩網(wǎng)過(guò)濾后形成單細(xì)胞懸液，離心后加入全培養(yǎng)基，37℃,5%CO₂條件下靜置培養(yǎng)，待細(xì)胞生長(zhǎng)鋪滿瓶底80%-90%時(shí)進(jìn)行傳代，培養(yǎng)三代后的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。?

3.如權(quán)利要求1所述的一種人類PMSCS體外免疫抑制作用分子機(jī)制的檢測(cè)方法，其中所述步驟3開(kāi)始使用的人外周血T淋巴細(xì)胞的分離純化方法如下：取健康人外周血用淋巴細(xì)胞分離液常規(guī)分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，貼壁后吸出富集的T細(xì)胞，再經(jīng)磁珠分選純化，純化后的T細(xì)胞純度達(dá)到95%以上。?