[發(fā)明專(zhuān)利]一種紅豆杉植物細(xì)胞種子穩(wěn)定培養(yǎng)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210506201.X
• 申請(qǐng)日: 2012-11-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102965329A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-03-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李干雄;侯云屏;古志淵;駱雪蘭;曾騰鋒;吳永艷;肖華
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣東科倫藥業(yè)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/04
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/04
• 代理公司: 廣州市越秀區(qū)海心聯(lián)合專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙) 44295
• 代理人: 黃為

1.一種紅豆杉植物細(xì)胞種子穩(wěn)定培養(yǎng)方法，其特征在于，依次包括下述步驟：

（1）對(duì)繼代的種子進(jìn)行取樣，檢測(cè)種子終生物量、培養(yǎng)液終pH、培養(yǎng)液終電導(dǎo)率、培養(yǎng)液終糖度；

（2）根據(jù)種子終生物量的大小，通過(guò)倒去培養(yǎng)液或加入水，將種子終生物量調(diào)整到5~10?g/L；

（3）根據(jù)種子培養(yǎng)液終糖度大小，加入糖溶液將種子繼代培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)液初始糖度提高到15~25?g/L；

（4）根據(jù)種子培養(yǎng)液終電導(dǎo)率大小，加入B₅培養(yǎng)基或濃縮B₅培養(yǎng)基將種子繼代培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)液初始電導(dǎo)率提高到2.5~3.5?ms/cm；

（5）將培養(yǎng)初始生物量控制在2.5~3.5g/L，種子繼代培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)液初始pH控制在5.0~6.0，攪拌轉(zhuǎn)速控制在10~130rpm，罐壓控制在0.03~0.07Mpa，25±2oC黑暗條件，調(diào)節(jié)通氣量大小并通過(guò)溶氧電極控制溶氧為20~60%，進(jìn)行種子繼代培養(yǎng)；

（6）當(dāng)步驟（5）中的繼代培養(yǎng)的種子，同時(shí)滿(mǎn)足A、B、C三個(gè)條件時(shí)：A、培養(yǎng)液終糖度大于8g/L；B、培養(yǎng)液終電導(dǎo)率大于2.0ms/cm；C、培養(yǎng)液終pH小于6.0；按步驟(1)~(5)啟動(dòng)下一次種子繼代培養(yǎng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紅豆杉植物細(xì)胞種子穩(wěn)定培養(yǎng)方法，其特征在于，種子繼代培養(yǎng)時(shí)所述的種子初始生物量控制在3.0g/L，種子終生物量控制在7.5g/L。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紅豆杉植物細(xì)胞種子穩(wěn)定培養(yǎng)方法，其特征在于，種子繼代培養(yǎng)時(shí)所述的溶氧控制在30~50%。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紅豆杉植物細(xì)胞種子穩(wěn)定培養(yǎng)方法，其特征在于，種子繼代培養(yǎng)時(shí)所述的攪拌轉(zhuǎn)速控制在30rpm，罐壓控制在0.05Mpa，培養(yǎng)溫度控制在25oC，在黑暗條件下進(jìn)行培養(yǎng)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紅豆杉植物細(xì)胞種子穩(wěn)定培養(yǎng)方法，其特征在于，種子繼代培養(yǎng)時(shí)所述的培養(yǎng)液初始糖度是21g/L，種子培養(yǎng)液終糖度大于8g/L。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紅豆杉植物細(xì)胞種子穩(wěn)定培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的糖是蔗糖、葡萄糖、果糖、麥芽糖、乳糖、半乳糖、可溶性淀粉的其中一種糖或兩種及兩種以上的糖組合。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紅豆杉植物細(xì)胞種子穩(wěn)定培養(yǎng)方法，其特征在于，種子繼代培養(yǎng)時(shí)所述的培養(yǎng)液初始電導(dǎo)率是3.0ms/cm，種子培養(yǎng)液終電導(dǎo)率大于2.0ms/cm。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紅豆杉植物細(xì)胞種子穩(wěn)定培養(yǎng)方法，其特征在于，種子繼代培養(yǎng)時(shí)的培養(yǎng)液初始pH范圍是5.0~6.0，培養(yǎng)液終pH小于6.0。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紅豆杉植物細(xì)胞種子穩(wěn)定培養(yǎng)方法，所述的種子繼代培養(yǎng)時(shí)更換B₅培養(yǎng)基或濃縮B₅培養(yǎng)基體積占總體積的比例是50~60%。