[發(fā)明專利]檢測人白細胞抗原HLA-B*1502 基因型的試劑盒及方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210501123.4
• 申請日: 2012-11-29
• 公開（公告）號: CN103114130A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張建東;李志新;譚曉利
• 申請（專利權(quán)）人: 瀚吉康生物科技（北京）有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11129
• 代理人: 張濤

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物領(lǐng)域，尤其涉及檢測人白細胞抗原HLA-B*1502基因型的試劑盒及方法。

背景技術(shù)

卡馬西平（carbamazepine）為三環(huán)類抗驚厥劑，被廣泛用于治療癲癇，三叉神經(jīng)痛，及躁狂抑郁癥等疾病。由于該藥被廣泛應用，其不良反應也日益突顯。較輕型不良反應為斑丘疹(maculopapular?exanthema-MPE)，包括史蒂文斯-約翰遜(Stevens-Johnson?syndrome-SJS)和中毒性表皮壞死松懈證（Toxic?epidermal?necrolysis–TEN）,drug?hypersensitivity?syndrome(HSS)等嚴重不良反應可危急生命。

臨床藥物基因組學研究已將卡馬西平導致的SJS-TEN與人白細胞抗原HLA-B*1502基因型密切關(guān)聯(lián)起來。近年的藥物基因組學在亞洲包含了不同國家與地區(qū)，如臺灣，香港，泰國，韓國，日本，與中國。這些研究發(fā)現(xiàn)94.1-100%的卡馬西平導致的SJS-TEN患者基因檢測結(jié)果為HLA-B*1502陽性；而非SJS-TEN發(fā)病者或正常對照HLA-B*1502基因型攜帶率為9-17%。其優(yōu)勢比（odds?ratio）可達2504。

卡馬西平是個性化醫(yī)療的典型范例。藥物基因組學（Pharmacogenomics,PGx）是根據(jù)病人的基因型特征，預測藥物的有效性，劑量，及不良反應，并使醫(yī)生制定個性化的治療方案。服藥前對病人進行快速，準確，可負擔的HLA-B*1502基因檢測，可有效預防SJS-TEN嚴重不良反應的發(fā)生，從而減低或消除病人痛苦，生命威脅，住院，及多次就診。美國FDA已要求華裔患者在服用卡馬西平前做HLA-B*1502基因檢測。

迄今常用基因型檢測方法包括Sanger法序列分析，基因芯片，Taqman，等位基因特異(Allele?Specific)AS-PCR,高分辨率熔解分析(High?Resolution?Melting-HRM)等方法，但這些技術(shù)有者各種優(yōu)缺點。如Sanger序列分析與基因芯片需購買核酸測序設(shè)備，且因開管操作易造成實驗室污染。Taqman與AS-PCR易造成假陽性或假陰性。AS?PCR因受被檢測多型性位點的限制，引物設(shè)計往往不能達到理想結(jié)果。HRM方法對擴增子長度有限制，且對A<->T等互換檢測靈敏度低。

盡管HLA-B*1502的基因檢測有重要臨床意義，當今HLA-B*1502的基因檢測面臨諸多問題。國內(nèi)目前最普遍應用的檢測方法為建立于1995年的序列特異引物（Sequence?SpecificPrimer?SSP-PCR）凝膠電泳法。此法每樣品需做4個獨立PCR反應，之后PCR跑瓊脂糖凝膠電泳，染色，照相；本法勞動強度大，易造成基因擴增實驗室污染，時間長。作為HLA-B*1502基因檢測的金標準，Sanger法測序也是較常用的方法；但測序法步驟多，時間長，成本高，且開管操作，也易造成基因擴增實驗室污染。芯片法設(shè)備昂貴，且裝機量少，步驟多，同樣需要開管操作。另外臺灣PharmiGen出售一種實時PCR?HLA-B*1502的基因檢測試劑盒，但不能區(qū)分多種等位基因從而造成假陽性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個目的是提供一種檢測人白細胞抗原HLA-B*1502基因型的試劑盒。

本發(fā)明所提供的檢測人白細胞抗原HLA-B*1502基因型的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包含以下引物序列：

上游引物FP：5’-CGACGCCGCGAGTCCCAGG-3’，

下游引物RP：5’-CGTCGTAGGCGGACTGGTCATA-3’。

所述試劑盒還包括以下探針序列：

探針PR:5’-Cy5-AACACACAGATCTCCAAGACCAACACAC-p-3’。

本發(fā)明的另一個目的是提供一種檢測人白細胞抗原HLA-B*1502基因型的PCR檢測方法。

本發(fā)明所提供的檢測人白細胞抗原HLA-B*1502基因型的PCR檢測方法，包括以下步驟：

（1）將待測DNA模板加入到含有特異性引物對和探針的PCR反應液中得到PCR反應體系；

（2）進行實時熒光定量PCR檢測；

其特征在于：所述特異性引物對和探針的序列如下：

上游引物FP：5’-CGACGCCGCGAGTCCCAGG-3’，

下游引物RP：5’-CGTCGTAGGCGGACTGGTCATA-3’，