[發明專利]可靈活置換調控元件的高效植物表達載體及其構建方法

無效

• 申請號: 201210500978.5
• 申請日: 2012-11-29
• 公開（公告）號: CN103060370A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 傅永福;王旭;朱金龍;張曉玫
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院作物科學研究所
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

1.可靈活置換調控元件的高效植物表達載體，其特征在于，由三類載體組成：基因入門克隆載體GEC、啟動子入門克隆載體PEC以及植物雙元目的載體BDV；其中，GEC和PEC分別攜帶一套位點特異的重組序列SSR，GEC攜帶的SSR為attL1和attL2，PEC攜帶的SSR為attL3和attL4，BDV上攜帶兩套SSR位點，其中一套為attR1和attR2，可分別與attL1和attL2進行位點特異的重組，另一套為attR3和attR4，可分別與attL3和attL4進行位點特異的重組，將GEC、PEC和BDV置于同一反應體系中，通過LR反應，即得。

2.根據權利要求1所述的植物表達載體，其特征在于，attL1、attL2、attL3、attL4、attR1、attR2、attR3和attR4的核苷酸序列分別如SEQ?ID?No.1-8所示。

3.根據權利要求1所述的植物表達載體，其特征在于，所述基因入門克隆載體GEC和啟動子入門克隆載體PEC的出發載體為pUC19。

4.根據權利要求1所述的植物表達載體，其特征在于，所述基因入門克隆載體GEC上含有下列元件中的一種或多種：多克隆位點MCS、Ahd?I酶切位點、ccdB基因、細菌篩選標記、蛋白標記。

5.根據權利要求1所述的植物表達載體，其特征在于，所述啟動子入門克隆載體PEC上含有下列元件中的一種或多種：多克隆位點MCS、AhdI酶切位點、ccdB基因、細菌篩選標記、順式調控元件、反式調控元件；優選所述順式調控元件為1或2個增強子。

6.根據權利要求4所述的植物表達載體，其特征在于，所述多克隆位點MCS含有18個酶切連接位點REL。

7.根據權利要求5所述的植物表達載體，其特征在于，所述多克隆位點MCS含有27個酶切連接位點REL。

8.根據權利要求1所述的植物表達載體，其特征在于，所述植物雙元目的載體BDV的骨架載體為pGreen和pClean。

9.根據權利要求1所述的植物表達載體，其特征在于，所述植物雙元目的載體BDV上含有細菌篩選標記和/或兩端帶有多個酶切連接位點REL的植物篩選標記。

10.權利要求1-9任一項所述植物表達載體的構建方法，其特征在于，將基因入門克隆載體GEC、啟動子入門克隆載體PEC以及植物雙元目的載體BDV置于同一反應體系中，通過LR反應獲得；其中，GEC和PEC分別攜帶一套位點特異的重組序列SSR，GEC攜帶的SSR為attL1和attL2，PEC攜帶的SSR為attL3和attL4，BDV上攜帶兩套SSR位點，其中一套為attR1和attR2，可分別與attL1和attL2進行位點特異的重組，另一套為attR3和attR4，可分別與attL3和attL4進行位點特異的重組。