[發明專利]枯草芽孢桿菌HJDA32菌株及其所產細菌素的制備方法

有效

• 申請號: 201210500205.7
• 申請日: 2012-11-30
• 公開（公告）號: CN103013861B
• 公開（公告）日: 2017-01-25
• 發明（設計）人: 賈麗艷;郝林;段先瑤
• 申請（專利權）人: 山西農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P21/00;C12R1/125
• 代理公司: 太原晉科知識產權代理事務所(特殊普通合伙)14110
• 代理人: 鄭晉周

1.一株枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)?HJD?A32菌株，其特征是：已于2012?年9月25日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC?No.6624。

2.根據權利要求1所述的枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)?HJD?A32菌株，其特征是：所述的枯草芽孢桿菌HJD?A32菌株是從山西省清徐老陳醋醋廠新鮮醋醅中分離篩選得到，在牛肉膏蛋白胨基礎培養基上、37℃條件下培養48h，呈桿狀、單個、成對或成鏈排列，大小為0.6～0.85μm×1.5～3.5μm，有莢膜，運動性較弱；幼齡菌培養2-18h，革蘭氏染色呈陰性反應；培養19-23h，革蘭氏染色呈陰陽性反應；培養24h，革蘭氏染色呈陽性反應，菌落呈圓形、邊緣整齊、凸起、光滑、半透明、無色素產生、粘稠、濕潤狀；在生芽孢培養基上、30℃條件下培養72h產生芽孢，芽孢呈橢圓形；在種子培養及發酵用培養液中培養48h，發酵液清亮、液面有白色膜；經過接觸酶、碳源利用試驗、明膠水解、淀粉水解、乙醇氧化、乙酸氧化、葡萄糖產酸產氣、初始生長pH檢測、最適生長溫度測定、檸檬酸鹽利用、吲哚試驗、水溶性色素試驗、5%NaCl、7%NaCl試驗、溶菌酶試驗、M.R、V.P、硝酸鹽還原等生理生化鑒定和16S?rDNA系統發育分析，鑒定該菌株為枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）。

3.根據權利要求2所述的枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)?HJD?A32菌株，其特征是：所述的牛肉膏蛋白胨基礎培養基是由下列質量/體積份的成分組成：牛肉膏0.5份，蛋白胨1份，NaCl?0.5份，瓊脂1.5份，蒸餾水100份，培養液的PH值為7.2-7.4。

4.根據權利要求2所述的枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)?HJD?A32菌株，其特征是：所述的生芽孢培養基是由下列質量/體積份的成分組成：酵母浸膏0.7份，蛋白胨0.1份，葡萄糖0.1份，(NH₄)₂SO_4??0.02份，MgSO₄·7H₂O?0.02份，K₂HPO_4??0.1份，蒸餾水100份，培養液的PH值為7.2-7.4。

5.枯草芽孢桿菌HJD?A32菌株所產細菌素的制備方法，步驟如下：

（1）制備發酵液??將枯草芽孢桿菌HJD?A32菌株接種到發酵用培養液中，在36-38℃條件下，培養46-48h，得到發酵液；

（2）制備細菌素??將（1）制備的發酵液經10000?r/?m離心15?min后取上清液，在上清液中緩慢加入硫酸銨固體粉末進行鹽析，邊加邊攪拌，直至飽和度達80％，然后在4-5℃條件下靜置12?h，再在4-5℃條件下、12000?r/?m?、離心30?min，棄去上清液得到細菌素。

6.根據權利要求5所述的枯草芽孢桿菌HJD?A32菌株所產細菌素的制備方法，其特征是所述的發酵用培養液是由下列質量/體積份的成分組成：葡萄糖1份，酵母浸膏1份，蒸餾水100份，培養液的PH值為7.2-7.4。

7.根據權利要求5所述的枯草芽孢桿菌HJD?A32菌株所產細菌素的制備方法，其特征是所述的枯草芽孢桿菌HJD?A32菌株產生的細菌素通過牛津杯法試驗,該細菌素的活力單位數為256AU/mL，可抑制多種食源性致病菌及引起食品腐敗變質的革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌。

8.根據權利要求5所述的枯草芽孢桿菌HJD?A32菌株所產細菌素的制備方法，其特征是所述的枯草芽孢桿菌HJD?A32菌株產生的細菌素是蛋白類抑菌物質。