[發明專利]抗白唇竹葉青蛇毒卵黃抗體的制備方法

無效

• 申請號: 201210500091.6
• 申請日: 2012-11-30
• 公開（公告）號: CN102964448A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: 和七一;余曉東;段海龍
• 申請（專利權）人: 重慶師范大學
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C07K16/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種抗白唇竹葉青蛇毒卵黃抗體的制備方法，其包括如下步驟：

(1)取成年白唇竹葉青蛇的蛇毒制備白唇竹葉青蛇毒抗原，將抗原注射到產蛋母雞中，免疫后收集雞蛋低溫保存；

(2)提取和純化抗白唇竹葉青蛇毒卵黃抗體：

①水稀釋法

取免疫后雞蛋，分離出蛋黃液，用雙蒸水將卵黃液按1∶8-10稀釋，調節pH值為5.0-5.2之間，攪拌均勻，0-4℃放置10h-12h，然后以16000-20000g/min低溫超速離心10-20min，上清液經超濾濃縮，即為卵黃抗體水提物；

②硫酸銨鹽析法

在卵黃抗體水提物中加入硫酸銨至35-45％飽和度，充分混勻，0-4℃放置6-10h，離心后棄上清，沉淀即為IgY鹽析物；

③嗜硫色譜法

先以pH?7.4-7.6的含0.5-0.7M?Na₂SO₄的15-25mM?PBS平衡HiTrap?IgYPurification?HP色譜柱，將IgY鹽析物用上述緩沖液溶解后過0.45μm濾膜，通過自動進樣閥上樣，洗脫未結合組分后，換用pH?7.4-7.615-25mM?PBS(不含Na₂SO₄)進行洗脫，流速1ml/min，檢測波長280nm，收集洗脫峰，經脫鹽處理后凍干，即得本發明的抗白唇竹葉青蛇毒卵黃抗體。

2.根據權利要求1所述的抗白唇竹葉青蛇毒卵黃抗體的制備方法，所述的取成年白唇竹葉青蛇的蛇毒是通過咬皿法取毒，冷凍干燥后低溫保存。

3.根據權利要求1所述的抗白唇竹葉青蛇毒卵黃抗體的制備方法，所述的將抗原注射到產蛋母雞中包括如下步驟：將白唇竹葉青蛇毒與弗氏佐劑按1∶1(v/v)充分乳化后，取22周齡產蛋萊航母雞，經雞雙翼、胸、腹部和背部皮下多位點注射；初次免疫劑量為0.33mg/只，于免疫后的14d、22d后改為不完全弗氏佐劑進行2次加強免疫，免疫劑量分別為0.66mg/只、1.32mg/只；免疫后每日收集雞蛋，編號后于4℃保存。

4.根據權利要求1所述的抗白唇竹葉青蛇毒卵黃抗體的制備方法，所述的抗白唇竹葉青蛇毒卵黃抗體在非還原性SDS-PAGE條件下分子量約為200KDa，在還原狀態下顯示該抗體包括重鏈和輕鏈。