[發(fā)明專利]一種抗CP4 EPSPS單克隆抗體的制備方法、編碼序列及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210499173.3
• 申請(qǐng)日: 2012-11-29
• 公開（公告）號(hào): CN103848916A
• 公開（公告）日: 2014-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 尹長(zhǎng)城;劉國(guó)振;吳琳;郝育杰;韋漢福;潘秦;韓宇寧;奚文輝;劉斯奇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京華大蛋白質(zhì)研發(fā)中心有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/40
• 分類號(hào): C07K16/40;G01N33/577
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種可以與轉(zhuǎn)基因植物中外源基因表達(dá)蛋白結(jié)合的抗體。具體而言，本發(fā)明提供了一種抗轉(zhuǎn)基因植物中常見的草甘膦抗性蛋白-5-烯醇丙酮酰-莽草酸-3-磷酸合成酶(5-enolpyruvyl-shikimate-3-phosphate?synthase，EPSPS)的單克隆抗體，可用于制備檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植物中常見CP4?EPSPS蛋白的試劑盒，屬于生物檢測(cè)領(lǐng)域。?

背景技術(shù)

草甘膦(Glyphosate)是一種廣泛使用的除草劑，具有高效、低毒、廣譜和易分解的特點(diǎn)，我國(guó)是草甘膦的生產(chǎn)和使用大國(guó)。抗草甘膦的轉(zhuǎn)基因植物是轉(zhuǎn)基因研究的重要對(duì)象，目前抗草甘膦轉(zhuǎn)基因植物是全球種植面積最大的轉(zhuǎn)基因品種，在抗草甘膦的基因中使用最多的是草甘膦N-乙酰轉(zhuǎn)移酶(glyphosate?N?acetyhransferase)基因，即GAT基因和5-烯醇丙酮酰-莽草酸-3-磷酸合成酶(5-enolpyruvyl-shikimate-3-phosphate?synthase)，即EPSPS，其中又以孟山都(Monsato)從土壤農(nóng)桿菌的CP4株系(Agrobacterium?strain?CP4)克隆的CP4EPSPS基因(5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate?synthases，美國(guó)專利US5633435)使用最為廣泛，目前廣泛用于大豆、玉米和棉花等轉(zhuǎn)基因作物中。通過(guò)將該基因的5’端與來(lái)自矮牽牛(Petunia)EPSPS基因的葉綠體轉(zhuǎn)運(yùn)肽(Transit?peptide)融合而使其產(chǎn)物高效定位于植物的葉綠體。?

隨著轉(zhuǎn)CP4?EPSPS基因植物的不斷發(fā)展及其商品化的種類不斷增加，轉(zhuǎn)基因生物本身的安全性以及它們對(duì)人類健康和生態(tài)環(huán)境的潛在威脅成為國(guó)際社會(huì)和廣大民眾廣泛關(guān)注的熱點(diǎn)問(wèn)題之一。包括我國(guó)在內(nèi)的越來(lái)越多的國(guó)家制定并實(shí)施了轉(zhuǎn)基因食品的強(qiáng)制標(biāo)識(shí)制度。因此，轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的科學(xué)管理和應(yīng)用需要得到轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品及其成分檢測(cè)技術(shù)的支持。目前，轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品及成分檢測(cè)最常用的方法有兩類：一類是針對(duì)其外源核酸成分的檢測(cè)技術(shù)；另一類是針對(duì)其外源蛋白質(zhì)成分的免疫學(xué)分析方法。基于DNA的檢測(cè)方法只能在核酸水平上反映轉(zhuǎn)基因樣品是否含有外源?DNA，不能檢測(cè)其外源基因是處于沉默還是表達(dá)，因此，其檢測(cè)結(jié)果與轉(zhuǎn)基因外源蛋白的實(shí)際含量并無(wú)直接關(guān)聯(lián)。加之，DNA在加工過(guò)程中會(huì)因降解掉而難以檢測(cè)，而核酸檢測(cè)方法必須經(jīng)過(guò)專門的核酸提取和純化過(guò)程，增加了額外的工作量。利用。基于外源蛋白的免疫學(xué)分析方法，如酶聯(lián)免疫分析法，采用高度特異性的抗原抗體反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)對(duì)轉(zhuǎn)基因植物樣本快速、準(zhǔn)確、高效的檢測(cè)，其技術(shù)關(guān)鍵是制備具有高度特異性的抗體，為提高檢測(cè)的特異性和靈敏度，可以采用多克隆抗體與單克隆抗體配合或者單克隆抗體配合實(shí)現(xiàn)夾心ELISA檢測(cè)的方式。?