[發明專利]白血病細胞蛋白質譜特征分子的檢測方法

無效

• 申請號: 201210496651.5
• 申請日: 2012-11-29
• 公開（公告）號: CN102967650A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: 許蘊;史敦云;王大平;陳旭紅;杜新;張曉麗;卓家才
• 申請（專利權）人: 深圳市第二人民醫院
• 主分類號: G01N27/62
• 分類號: G01N27/62
• 代理公司: 深圳市中知專利商標代理有限公司 44101
• 代理人: 孫皓;林虹

技術領域

本發明涉及一種白血病細胞特征分子的檢測方法，特別是一種檢測特征分子（未知蛋白質）在不同類型白血病細胞中表達的敏感性和特異性的方法。

背景技術

目前血液病的分子檢測方法尤其是白血病傳統分型（WHO分型）包含了造血細胞形態學信息、免疫學信息及遺傳學信息，尚缺乏蛋白質組學特別是質譜特征信息。蛋白質是生命活動及疾病發生發展的物質基礎。隨著高通量質譜檢測方法（SELDI）的發展，質譜檢測方法在疾病的早期檢測、療效觀察、微小殘留病監測等方面展現了良好的臨床應用前景，通過質譜檢測發現了大量差異蛋白，特別是有關腫瘤細胞蛋白質譜特征的研究，為惡性腫瘤的早期監測和發現帶來新的手段。目前，以單抗為探針檢測單個白血病活細胞的蛋白質表達，根據免疫表型分型進行白血病蛋白質免疫分型，具有及時、準確的特點，是臨床檢測白血病細胞的主要手段，在白血病診治活動中具有重要作用。然而，這種檢測方法以已知蛋白質（單抗檢測的抗原）為基礎，可檢測蛋白質數量僅數十種，對白血病細胞的蛋白質信息的了解很不全面，不能更好地指導白血病治療。白血病細胞表達的蛋白質數量超過千種，檢測其包含未知蛋白質在內的蛋白質組將能獲得更多重要信息。目前，關于白血病細胞的蛋白質組特征分子的信息都是基于單個類型白血病的質譜研究，這種研究可以發現特征分子，但不能明確特征分子的多種特性及其分類價值，對進一步純化和鑒定特征分子缺乏指導作用。對不同類型白血病細胞的蛋白質譜特征分子的研究可以解決該缺點，但尚缺乏可行的分析方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種白血病細胞蛋白質譜特征分子的檢測方法，要解決的技術問題是建立白血病細胞的蛋白質譜分析模型。

本發明提供了一種白血病細胞蛋白質譜特征分子的檢測方法，包括如下步驟：

步驟一：用表面加強激光解吸電離-飛行時間質譜儀測定四種不同白血?。涸缬琢＜毎籽　⒓毙运柘盗＜毎籽?、急性髓系單核細胞白血病、急性淋巴細胞白血病及對照組健康骨髓中的單個核細胞的蛋白質譜圖，并將其集合成蛋白質譜圖庫；

步驟二：應用蛋白質芯片數據采集系統、生物標志物向導系統處理所述蛋白質譜圖庫形成蛋白質譜圖數據庫，再用生物標志物分析系統對蛋白質譜圖數據庫進行分析，以蛋白質譜圖數據庫的特征分子建立白血病細胞蛋白質譜分析模型；

步驟三：從白血病細胞蛋白質譜分析模型中讀取不同類型白血病細胞的特征分子及其表達特性，篩選出用來顯著區分各組的特征分子:健康骨髓單個核細胞特征分子M3667和M3829；早幼粒細胞白血病特征分子M1593和M1695；急性髓系粒細胞白血病特征分子M2121；急性髓系單核細胞白血病特征分子M2536；急性淋巴細胞白血病特征分子M1016。

所述步驟二中白血病細胞蛋白質譜分析模型中檢測四種白血病細胞和健康細胞的差異蛋白優選由以下蛋白質質荷比峰組成：3667m/z，1593m/z，2536m/z，3680m/z，1133m/z，1047m/z，4884m/z，3025m/z；2121m/z，2678m/z，1212m/z，1097m/z，11156m/z，1503m/z，1695m/z，1964m/z，1215m/z，5539m/z，1000m/z，1213m/z，1497m/z，1111m/z。

所述步驟二中白血病細胞蛋白質譜分析模型中：

檢測急性淋巴細胞白血病的差異蛋白優選由以下蛋白質質荷比峰組成：

3667m/z，1593m/z，2536m/z，3680m/z，1047m/z，

或3667m/z，1593m/z，2536m/z，3680m/z，1133m/z，4484m/z，1215m/z，

或3667m/z，1593m/z，2536m/z，1097m/z，5539m/z，

或3667m/z，1593m/z，1695m/z，3025m/z，1503m/z，

或3667m/z，1593m/z，1695m/z，3025m/z，1503m/z，1000m/z，

或3667m/z，1593m/z，1695m/z，3025m/z，1212m/z，1213m/z，

或3667m/z，1593m/z，1695m/z，2121m/z，11156m/z，2678m/z，1111m/z；

檢測早幼粒細胞白血病的差異蛋白優選由以下蛋白質質荷比峰組成：

3667m/z，1593m/z，1695m/z，3025m/z，1212m/z，1213m/z，