[發明專利]一種通過酶解和微生物發酵生產高效生物肽的方法

有效

• 申請號: 201210495067.8
• 申請日: 2012-11-28
• 公開（公告）號: CN102994605A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 張有聰;郝永清;史彬林;任國軍
• 申請（專利權）人: 張有聰
• 主分類號: C12P39/00
• 分類號: C12P39/00;C12P21/06;A23K1/16;C12R1/125;C12R1/685;C12R1/69;C12R1/74
• 代理公司: 北京北新智誠知識產權代理有限公司 11100
• 代理人: 王淳

1.一種通過酶解和微生物發酵生產高效生物肽的方法，其特征在于，

（1）將發酵底物粉碎并混合均勻后，加水拌料，然后蒸煮滅菌；

（2）滅菌后的發酵底物溫度降到50～55℃時，加入蛋白酶進行水解；

（3）發酵底物水解完畢后，溫度降至28～35℃時，將混合菌液加入水解后的發酵底物中，攪拌均勻，在恒溫條件下好氧發酵；

（4）發酵完畢的物料經低溫烘干后進行粉碎即得到所述高效生物肽成品；

步驟（1）中，所述的發酵底物的組成為：高蛋白豆粕50～60重量份、谷氨酸菌體蛋白10～20重量份以及脫酚棉籽蛋白30～40重量份；各組分經粉碎并過40目篩后混合均勻；

步驟（3）中，所述的混合菌液為黑曲霉、熱帶假絲酵母、米曲霉和枯草芽孢桿菌的菌液按照1:1:1:1的比例混合得到的混合菌液；混合菌液按5～10%的重量百分比接種入水解后的發酵底物中。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）中所述的加水拌料，是對發酵底物按料水比1:1～2加水后進行拌料，拌料后發酵底物的水分在40～55%之間；加入的水提前用0.1～0.2mol/L的鹽酸和氫氧化鈉調節pH到6.0-7.0之間；

步驟（1）中所述的蒸煮滅菌，是在115～121℃、0.07～0.11MPa條件下蒸煮滅菌20～30min。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中所述的蛋白酶為木瓜蛋白酶，按發酵底物重量的1～2‰加入40萬U/g的木瓜蛋白酶。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中所述的水解為保持50～55℃的溫度水解10～12h。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的黑曲霉菌液和米曲霉菌液是按以下方法制成的：

制備一級種子培養基：蔗糖30g、NaNO₃3g、MgSO₄·7H₂O?0.5g、KCl?0.5g、FeSO₄·4H₂O?0.014g、K₂HPO₄1.0g，蒸餾水1000mL混合均勻，調節pH為6.0～6.5，在溫度115～121℃下滅菌20～30min；

制備二級種子培養基和發酵培養基：葡萄糖20kg、麥芽浸粉5kg、酵母浸粉5kg、玉米粉10kg，無菌純水1000L，pH自然，在溫度115～121℃下滅菌20～30min；

一級種子培養：1000mL三角瓶中裝一級種子培養基500mL，接入菌種斜面制成濃度1.5～2.0×10⁶個/mL的孢子懸液50mL，28～30℃下以130r/min振蕩培養24h；

二級種子培養：將經所述一級種子培養的菌液按照5～10%的重量比接種到二級種子罐中，在28～30℃、通風量體積比為1:0.5～1的條件下，以100r/min機械攪拌，培養24～48h；

液體發酵培養：將經所述二級種子培養的菌液按照5～10%的質量比接種到發酵罐中，在28～30℃、通風量體積比為1:0.5～1的條件下，以100r/min機械攪拌，培養24～48h。