[發(fā)明專(zhuān)利]一種測(cè)定多糖蛋白結(jié)合物中游離多糖含量的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210494917.2
• 申請(qǐng)日: 2012-11-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103837671B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-06-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙秋敏;孫倩;李軍強(qiáng);金永杰;李亞冰;劉賀軍;李劍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 天士力制藥集團(tuán)股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/50
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/50;G01N1/38
• 代理公司: 北京華科聯(lián)合專(zhuān)利事務(wù)所(普通合伙)11130
• 代理人: 王為

1.一種多糖蛋白結(jié)合物中游離多糖含量的測(cè)定方法，其特征在于，步驟如下：

1)取待測(cè)的多糖蛋白結(jié)合物原液，冰水浴條件下，加入0.3％～3％的脫氧膽酸鈉溶液，添加量為結(jié)合物原液體積的5％～15％，充分混勻，靜止20min～40min；然后加入100％三氯乙酸溶液，添加量為結(jié)合物原液體積的0.1％-1％，混勻后4～8℃，8000rpm～12000rpm，離心15～20min；

2)取離心后的上清為測(cè)定樣品A，取待測(cè)的結(jié)合物原液為待測(cè)樣品B，利用化學(xué)方法或者免疫學(xué)方法分別測(cè)定樣品A和樣品B中的多糖含量為a和b；

3)多糖蛋白結(jié)合物中游離多糖含量即為a/b×100％；

其中，多糖蛋白結(jié)合物選自：肺炎鏈球菌多糖-CRM197、PRP-CRM197、或A群腦膜炎球菌多糖-CRM197。

2.如權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于，步驟如下：

1)取待測(cè)的多糖蛋白結(jié)合物原液，冰水浴條件下，1％脫氧膽酸鈉溶液，添加量為結(jié)合物原液體積的10％，充分混勻，靜止20min～40min；然后加入100％三氯乙酸溶液，添加量為結(jié)合物原液體積的0.5％，混勻后4℃，12000rpm，離心15min；

2)取上清為測(cè)定樣品A，取待測(cè)的結(jié)合物原液為待測(cè)樣品B，利用化學(xué)方法或者免疫學(xué)方法分別測(cè)定樣品A和樣品B中的多糖含量為a和b；

3)多糖蛋白結(jié)合物中游離多糖含量即為a/b×100％。

3.如權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于，步驟2中所述的化學(xué)方法選自硫酸蒽酮法、核糖測(cè)定法、磷含量測(cè)定法或者唾液酸測(cè)定法。

4.如權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于，步驟2中所述的免疫學(xué)方法為酶聯(lián)免疫吸附法或者免疫濁度法。

5.如權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于，所述的肺炎鏈球菌多糖蛋白結(jié)合物為以下任意一種肺炎鏈球菌的多糖蛋白結(jié)合物：1型，2型，3型，4型，5型，6A型，6B型，7F型，8型，9V型，9N型，10A型，12F型，14型，15B型，17F型，18C型，19A型，19F型，20型，22F型，23F，33F型。

6.如權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于，所述多糖蛋白結(jié)合物原液中多 糖濃度為50-150ug/ml。

7.如權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于，所述多糖蛋白結(jié)合物原液中多糖濃度為100ug/ml。