[發(fā)明專利]粉狀葡萄土壤桿菌菌株AE206生物農(nóng)藥的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210491794.7
• 申請日: 2012-11-27
• 公開（公告）號: CN102960368A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 梁洪柱;田會鵬;陳倩;李學(xué)燕
• 申請（專利權(quán)）人: 北京市西山試驗林場
• 主分類號: A01N63/02
• 分類號: A01N63/02;A01P1/00
• 代理公司: 北京慶峰財智知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11417
• 代理人: 劉元霞

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種生物農(nóng)藥的制備方法，特別是葡萄土壤桿菌菌株AE206生物農(nóng)藥的制備方法，屬于葡萄土壤桿菌菌株AE206生物農(nóng)藥制備領(lǐng)域。

背景技術(shù)

根癌病是由根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium?tumefaciens)引起的一種世界范圍的細菌性病害，病原菌寄主范圍廣，可侵染93科331屬643種高等植物，除侵染桃、李、杏、櫻桃、梨、蘋果等主要果樹外，還能危害葡萄、棗、木瓜、板栗、核桃等多種果樹。病樹樹勢衰弱，生長遲緩，產(chǎn)量降低，壽命縮短，嚴重者絕產(chǎn)甚至死亡。葡萄土壤桿菌菌株AE206(Agrobacteriun?vitis?AE206)為細菌生物制劑,該菌屬于土壤桿菌，能在葡萄等苗木根部定殖，保護傷口、產(chǎn)生抗菌素抑制根癌病菌，對根癌病有良好的預(yù)防作用。

關(guān)于葡萄土壤桿菌菌株AE206生物農(nóng)藥的制備方法目前報道的不多。CN101451112A（CN101451112B，2010年9月15日授權(quán)）公開了一種葡萄土壤桿菌菌株AE206（保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏登記號為CGMCC?No.2408）、其菌劑和制備方法，但不具備規(guī)模化生產(chǎn)水平。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，通過對葡萄土壤桿菌菌株AE206生物農(nóng)藥制備方法中各種工藝條件的選擇，提供一種可大規(guī)模生產(chǎn)葡萄土壤桿菌菌株AE206生物農(nóng)藥的方法，獲得的葡萄土壤桿菌菌株AE206生物農(nóng)藥的袍子產(chǎn)量高、生產(chǎn)成本低。

本發(fā)明通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)：

一種粉狀葡萄土壤桿菌菌株AE206生物農(nóng)藥的制備方法，其包括如下步驟：制備菌種；第一次發(fā)酵，即種子罐發(fā)酵；第二次發(fā)酵，即生產(chǎn)罐發(fā)酵；制造粉狀生物農(nóng)藥，其特征在于，所述制備菌種中，搖瓶培養(yǎng)基由蔗糖、牛肉膏、酵母粉或酵母抽提粉、MgSO₄·7H₂O和蒸餾水構(gòu)成；所述第一次發(fā)酵中，所用培養(yǎng)基由蔗糖、酵母膏、K₂HPO₄、MgSO₄·7H₂O、KCl、CaCl₂和水構(gòu)成；所述第二次發(fā)酵中，所用培養(yǎng)基由綿白糖、玉米漿膏、K₂HPO₄、MgSO₄·7H₂O、KCl、CaCl₂和水構(gòu)成。

如上所述制備方法，所述制備菌種中的搖瓶培養(yǎng)基的具體組成為：蔗糖5g、牛肉膏5g、酵母粉或酵母抽提粉1g、MgSO₄·7H₂O?0.5g和蒸餾水1000ml。

如上所述制備方法，所述第一次發(fā)酵中所用培養(yǎng)基的具體組成為：蔗糖20g、酵母膏5g、K₂HPO₄?3g、MgSO₄·7H₂O?0.3g、KCl?0.15g、CaCl₂?0.01g和水1000ml。

如上所述制備方法，所述第二次發(fā)酵中所用培養(yǎng)基的具體組成為：綿白糖20g、玉米漿膏15g、K₂HPO₄?3g、MgSO₄·7H₂O?0.3g、KCl?0.15g、CaCl₂?0.01g和水1000ml。

如上所述制備方法，所述制備菌種中，搖瓶培養(yǎng)的搖瓶的裝量為1/3，搖床轉(zhuǎn)速為180rpm。

如上所述制備方法，所述第一次發(fā)酵中，發(fā)酵罐的裝罐系數(shù)為0.6-0.7、攪拌速度為200-300rpm。

如上所述制備方法，所述第二次發(fā)酵中，發(fā)酵罐的裝罐系數(shù)為0.6-0.7、攪拌速度為200-300rpm。

本發(fā)明的有益效果：通過本發(fā)明的方法，可以獲得含水量為10-30%的粉狀制劑，每批次可生產(chǎn)所述粉狀制劑2000kg以上，優(yōu)選2400kg至2800kg，其活菌數(shù)在109cfu/g以上，可以實現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)，且生產(chǎn)成本低。

具體實施方式

根據(jù)本發(fā)明的制備方法，其中菌株為葡萄土壤桿菌菌株AE206，是可以購買得到的，也可以通過如CN101451112A中公開的方法培養(yǎng)得到，即采用平板培養(yǎng)基（牛肉膏，NaCl,瓊脂等），在25～33°C培養(yǎng)48小時。所述菌株可通過以下方法保存：（1）長期保存方法：冷凍干燥保存；（2）短期保存方法：試管斜面液體石蠟封存2-4°C低溫保存。