[發明專利]油菜BnRabGDI3啟動子的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201210491386.1
• 申請日: 2012-11-27
• 公開（公告）號: CN102965374A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: 劉勝毅;董彩華;黃軍艷;李振波;劉越英;程曉輝
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/10;C12N15/84;A01H5/02
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種分離的啟動子PBnRabGDI3，其序列為SEQ?ID?No.1?所示的核苷酸序列。

2.根據權利要求1所述的一種分離的啟動子，其特征在于：所述的啟動子含有重組載體pBI-?PBnRabGDI3。

3.權利要求1所述的一種甘藍型油菜啟動子PBnRabGDI3的制備方法，其步驟是：?

（1）油菜啟動子PBnRabGDI3的引物序列：

根據油菜全基因組測序獲得的Bn?RabGDI3基因上游2kb序列設計一對引物進行PCR擴增，擴增獲得油菜BnRabGDI3的5’上游啟動子序列，所用引物為PBnRabGDI3S：5?′CAGaagcttGAGTAAATACAGAACAGTGTTAC-3?′和PBnRabGDI3A：5′-??GACAtctagaTGTTGCAACCAATCTCTATTATC-3?′;

（2）油菜啟動子PBnRabGDI3的制備:

根據油菜全基因組測序獲得的BnRabGDI3的5’上游2kb序列設計所用的引物：PBnRabGDI3S和PBnRabGDI3A，利用SDS裂解法提取油菜葉片基因組DNA，以此為模板進行PCR擴增，步驟是：提取油菜基因組DNA?25μl，以此為模板進行擴增，反應體系為50?μl，分別添加10×Ex?Taq?buffer?5?μl，dNTP?4?μl，5’引物?1?μl，3’引物?1?μl，ExTaq??0.5?μl，DNA模版1?μl50ng，ddH2O?37.5μl，?擴增產物大小為2064?bp，PCR反應程序為94℃?5?分鐘，94℃1?分鐘，60℃?1分鐘，72℃?2分鐘，33個循環，72℃?10分鐘，16℃?3小時，PCR產物經1.0%質量體積比瓊脂糖凝膠電泳檢測，凝膠回收試劑盒純化回收后，連接到pMD18-T載體，熱激法轉化gold菌株的感受態細胞，挑取陽性克隆，PCR檢測陽性和酶切驗證后測序，得到目的基因上游2kb側翼序列，經過生物信息學分析此序列為BnRabGDI3的啟動子全長序列，命名為PBnRabGDI3。

4.權利要求1中所述的一種分離的啟動子PBnRabGDI3在擬南芥花藥中的應用。

5.權利要求1中所述的一種分離的啟動子PBnRabGDI3在擬南芥花粉粒中的應用。