[發明專利]C型凝集素及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201210489807.7
• 申請日: 2012-11-27
• 公開（公告）號: CN103833839A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發明（設計）人: 張嶸;張景海;吳春福
• 申請（專利權）人: 沈陽藥科大學
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N15/12;C07K1/18;C07K1/22;C07K1/20;C07K1/16;C07K1/30;C07K1/34;C07K1/36;C12N15/63;C12N15/70;C12N15/75;C12N15/81;C
• 代理公司: 沈陽杰克知識產權代理有限公司 21207
• 代理人: 李宇彤

1.C型凝集素，其特征在于，其氨基酸序列如圖2—（A）所示。

2.編碼權利要求1所述的C型凝集素的基因，其特征在于，其序列如圖2—（B）所示。

3.根據權利要求1所述的C型凝集素，其特征在于，所述的C型凝集素來源于鱗翅目（Lepidoptera）天（大）蠶蛾科（Saturniidae）昆蟲，選自柞蠶、蓖麻蠶、天蠶、印度柞蠶、琥珀蠶、美國柞蠶、樗蠶、大山蠶、美洲天蠶、樟蠶、楓蠶，所述的昆蟲為任何地域的天然或人工放養或人工飼養的昆蟲。

4.C型凝集素衍生物或類似物或活性片段，其特征在于，包含圖2—（A）所述的氨基酸序列全序或片段。

5.如權利要求4所述的C型凝集素衍生物或類似物或活性片段，其特征在于，其序列如圖3所示，選自Met-C型凝集素、Met-組氨酸標簽-C型凝集素、Met?-C型凝集素-組氨酸標簽、Met-GST標簽-C型凝集素、Met?-C型凝集素-GST標簽；C型凝集素全長肽鏈、Met-組氨酸標簽-C型凝集素全長肽鏈、Met-C型凝集素全長肽鏈-組氨酸標簽、Met-GST標簽-凝血酶酶切位點-C型凝集素全長肽鏈或Met-C型凝集素全長肽鏈-凝血酶酶切位點-GST標簽。

6.重組C型凝集素及其衍生物、類似物、活性片段，其特征在于，表達產物具有C型凝集素的生物學活性。

7.如權利要求1所述的C型凝集素的制備方法，其特征在于，利用鱗翅目天蠶蛾科昆蟲的血淋巴，以昆蟲血液或血細胞裂解物和淋巴液的混合物或/和昆蟲壓榨或勻漿的體液作為分離純化的原料液，原料液經過單獨的離子交換層析或疏水層析或親和層析或凝膠過濾或鹽析或超濾分離純化C型凝集素，或通過離子交換層析、疏水層析、親和層析、凝膠過濾、鹽析或超濾分離純化方法中的兩個或多個的組合以及其分離純化方法順序的重排組合獲得電泳純乃至HPLC純度的C型凝集素。

8.如權利要求7所述的制備方法，其特征在于：所述的離子交換層析、疏水層析、親和層析、凝膠過濾、鹽析或超濾方法中：

（1）操作溫度在0℃-45℃，優選0℃-10℃；

（2）溶液的酸堿度在pH2-pH12，優選pH4-pH10；

（3）調節溶液酸堿度的試劑為是常規、通用的酸、堿、酸溶液或堿溶液，酸或酸溶液優選HCl、HAc、磷酸、檸檬酸、硫酸、硼酸或它們的溶液，堿或堿溶液優選NaOH、KOH、Tris、檸檬酸鈉或鉀鹽、磷酸鈉或鉀鹽、硼砂或它們的溶液；

（4）緩沖液是常規、通用緩沖離子對緩沖液，優選檸檬酸根緩沖離子對、HCl-Tris緩沖離子對、檸檬酸根-磷酸根緩沖離子對、磷酸根緩沖離子對、醋酸根緩沖離子對、硼酸根緩沖離子對、硼酸-Tris緩沖離子對或上述各緩沖離子的組合；

（5）溶液或緩沖液的離子強度在0.001mol/L-0.5mol/L，優選0.01mol/L-0.1mol/L。

9.根據權利要求1所述的C型凝集素或權利要求4所述的C型凝集素衍生物或類似物或活性片段的基因表達方法，其特征在于，所述的基因表達體系包括（1）原核生物系統的表達載體，表達宿主細胞為大腸桿菌細胞或枯草桿菌細胞，（2）酵母細胞系統的表達載體，表達宿主細胞為酵母細胞，（3）昆蟲細胞系統的表達載體，表達宿主細胞為昆蟲細胞，（4）哺乳動物細胞系統的表達載體，表達宿主細胞為哺乳動物細胞，（5）上述表達形式為細胞內表達或分泌形式表達。

10.權利要求1所述的C型凝集素或權利要求4所述的C型凝集素衍生物或類似物或活性片段的基因表達產物的制備方法，其特征在于，它包括：

（1）利用基因工程技術表達C型凝集素、C型凝集素衍生物或類似物或活性片段；

（2）從上述表達體系中分離純化重組的C型凝集素、重組的C型凝集素衍生物或類似物或活性片段；

（3）上述表達產物經過單獨的離子交換層析或疏水層析或親和層析或凝膠過濾或鹽析或超濾分離純化重組C型凝集素活性組分、重組C型凝集素衍生物或類似物或活性片段；

（4）上述表達產物通過離子交換層析或疏水層析或親和層析或凝膠過濾或鹽析或超濾分離純化方法中兩個或幾個分離純化方法的組合以及其分離純化方法順序的重排組合獲得電泳純乃至HPLC純度的重組C型凝集素、重組C型凝集素衍生物或類似物或活性片段。