[發明專利]一種天麻中總DNA的提取方法

無效

• 申請號: 201210489791.X
• 申請日: 2012-11-27
• 公開（公告）號: CN103834635A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發明（設計）人: 楊超
• 申請（專利權）人: 楊超
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C07H21/04;C07H1/08
• 代理公司: 成都天嘉專利事務所(普通合伙) 51211
• 代理人: 蘇丹

1.一種天麻中總DNA的提取方法，其特征在于：包括以下工藝步驟：

A、預處理

將天麻干燥，然后粉碎成天麻粉末，再研磨成微末；

B、CTAB提取

向步驟A得到的天麻微末中加入60-70℃的十六烷基三甲基溴化銨緩沖液，在65-85℃的水浴中加熱25-45分鐘，加入四氫呋喃和丙酮，離心分離，取上清液備用；

C、SDS提取

向步驟B得到的上清液中加入65-70℃的十二烷基硫酸鈉緩沖液，混合均勻后保溫放置20-35分鐘，在2-5℃下離心分離，取上清液，加入氯仿和異丙醇，再在常溫下進行一次離心分離，置于-10-1℃下40-50分鐘，去除上清液，將其沉淀用乙醇洗2-5次，再加入RNA水解酶，在35-46℃下保溫1-2小時得到天麻總DNA提取物。

2.根據權利要求1所述的一種天麻中總DNA的提取方法，其特征在于：在步驟A中，所述的將天麻粉碎為粉碎成20-50目。

3.根據權利要求1所述的一種天麻中總DNA的提取方法，其特征在于：在步驟A中，所述的研磨成微末是采用石英砂進行研磨。

4.根據權利要求1所述的一種天麻中總DNA的提取方法，其特征在于：在步驟B中，所述的十六烷基三甲基溴化銨緩沖液的加入量為天麻與十六烷基三甲基溴化銨緩沖液的重量體積比為1:2-3.5。

5.根據權利要求1所述的一種天麻中總DNA的提取方法，其特征在于：在步驟B中，所述的四氫呋喃和丙酮的加入量的總和與所述的十六烷基三甲基溴化銨緩沖液加入量相等。

6.根據權利要求5所述的一種天麻中總DNA的提取方法，其特征在于：所述的四氫呋喃和丙酮加入量之比為12-20:1。

7.根據權利要求1所述的一種天麻中總DNA的提取方法，其特征在于：在步驟B和步驟C中，所述的離心分離具體為在500-1000轉/分鐘的轉速下離心分離10-25分鐘。

8.根據權利要求1所述的一種天麻中總DNA的提取方法，其特征在于：在步驟C中，所述的十二烷基硫酸鈉緩沖液的加入量為天麻與十二烷基硫酸鈉緩沖液的重量體積比為1:8-16。

9.根據權利要求8所述的一種天麻中總DNA的提取方法，其特征在于：所述的氯仿和異丙醇的加入量的總和與所述的十二烷基硫酸鈉緩沖液加入量相等。

10.根據權利要求1所述的一種天麻中總DNA的提取方法，其特征在于：在步驟C中所述的RNA水解酶的濃度為30-50mg/L。