[發明專利]蟲生真菌萊氏野村菌及其培養方法與應用

無效

• 申請號: 201210489557.7
• 申請日: 2012-11-27
• 公開（公告）號: CN103087924A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發明（設計）人: 任應黨;崔筱;張書杰;劉新濤;王剛;劉玉霞;趙輝;劉紅彥
• 申請（專利權）人: 河南省農業科學院
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N3/00;A01N63/04;A01P7/04;C12R1/645
• 代理公司: 鄭州大通專利商標代理有限公司 41111
• 代理人: 樊羿

技術領域

本發明涉及生物防治領域，具體涉及一種殺蟲真菌—萊氏野村菌及其培養方法與應用。?

背景技術

與其它殺蟲微生物相比，真菌具有其特殊優勢：觸殺性、流行性、對環境安全和不易產生抗藥性；培養生產簡單，產業化容易；對Bt類殺蟲劑目前無法防治的地下害蟲、蛀干害蟲、刺吸式口器害蟲的防治有特效等等，因此，真菌殺蟲劑的研究開發已引起了研究人員廣泛的關注和重視。?

萊氏野村菌[Nomuraea?rileyi（Farlow)Samson]是一種分布廣泛的昆蟲病原真菌，能寄生40多種昆蟲，特別是對鱗翅目夜蛾科害蟲幼蟲的致病力較強，在田間可引發棉鈴蟲、斜紋夜蛾、甜菜夜蛾、黎豆夜蛾、大豆夜蛾等多種害蟲的疾病流行，對害蟲種群有一定的控制作用，自該菌被分離鑒定以后，逐漸被各國科學家所重視，具有較高的開發利用價值。?

但來源不同的萊氏野村菌菌株不但在菌落生長量、產孢量及孢子萌發率等方面存在明顯的差異，而且其殺蟲效果也大不相同，然而產孢量、孢子萌發率、殺蟲效果等是影響萊氏野村菌菌株在農業生防中應用的重要因素。?

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種殺蟲效果良好的蟲生真菌萊氏野村菌，并提供了一種產孢量大且孢子萌發率高的萊氏野村菌培養方法。?

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是：?

一種萊氏野村菌（Nomuraea?rileyi）Nr1001，其保藏編號為CGMCC?No.?6387。

利用上述蟲生真菌萊氏野村菌生產孢子的方法，包括以下步驟：?

（1）試管菌種制備：將Nr1001菌株接種到試管SMAY斜面培養基上，26～28℃下培養144小時獲得試管菌種；

（2）種子液制備：取斜面菌種，每支用滅菌的0.05%?(v/v)?Tween-80沖洗制得孢子液，接種到裝有50mL?SMY的250mL三角瓶至終濃度為1×10⁶孢子/mL，于26℃、180?r/min搖床培養144小時，作為液體種子液備用；

（3）培養基質制備：稱取一定量基質料，并按2g：1ml的固液比向基質料中入蒸餾水，經高壓滅菌后冷卻，并按基質料重量的4～8%加入麥芽糖和1～3%的酵母粉，即成培養基質，所述基質料為小麥、大豆、大米、麥麩中的至少一種，且所述大豆和小麥加蒸餾水浸泡至少12小時后再進行高壓滅菌處理；

（4）將上步所得基質打碎凝結塊，并按1ml:12g的接種量向其中接入步驟（2）所得種子液，充分搖勻，于如下的培養條件下培養14d后分離出孢子：培養溫度25～30℃，95%的空氣濕度，pH6～8、8L光照。

在所述步驟（3）中，最佳的基質料為大豆基質，經浸泡、高壓滅菌后，按大豆基質重量的6%加入麥芽糖。?

將種子液接種到大豆基質上可進行規模化生產，大豆基質制備如下：60g大豆加30ml水浸泡過夜，打碎后滅菌，加入6%的麥芽糖和2%酵母粉，接入5ml上述種子液，充分搖勻，置于25℃下培養14天，發酵產品常溫晾干，粉碎后即制得孢子粉。?

上述生物制劑可以通過噴霧的方法施用，可單獨使用，也可與白僵菌、綠僵菌、蘇云金桿菌等生物殺蟲劑、植物調節劑混合使用。一般在幼蟲孵化至3齡前噴霧。?

本發明具有積極有益的效果：?

所篩選出的N.rileyi?1001菌株殺蟲效果好，室內Nr1001菌株對棉鈴蟲三齡幼蟲的殺蟲效果達70%以上；田間防治棉鈴蟲、甜菜夜蛾等害蟲的效果達90%以上，與之前所報道的其他萊氏野村菌菌株相比，無論在產孢量還是殺蟲效果上，都有一定的優勢；而且，該菌株的殺蟲譜廣，對鱗翅目夜蛾科幼蟲如棉鈴蟲、甜菜夜蛾、斜紋夜蛾、黎豆夜蛾、大豆夜蛾等均有較強的感染作用，可造成田間害蟲大面積流行。由此可見，Nr1001菌株具有較好的殺蟲效果，具有較好的工業化生產前景。

本發明的生物制劑的制備方法簡單，篩選出了成本低廉的工業大規模培養用培養基，大大降低了生產成本，有利于該生物制劑的應用普及。?

本發明所述萊氏野村菌（Nomuraea?rileyi）Nr1001，已于2012年7月31日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其簡稱為CGMCC，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號?中國科學院微生物研究所，該萊氏野村菌（Nomuraea?rileyi）Nr1001的保藏編號為CGMCC?NO.6387。?