[發(fā)明專利]禽流感血凝素抗原保護(hù)劑及提高胚液中禽流感血凝素穩(wěn)定性的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210489259.8
• 申請(qǐng)日: 2012-11-26
• 公開（公告）號(hào): CN102942619A
• 公開（公告）日: 2013-02-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張東霞;陳瑞愛;徐家華;湯欽;黃妙容
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 肇慶大華農(nóng)生物藥品有限公司;廣東大華農(nóng)動(dòng)物保健品股份有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/11
• 分類號(hào): C07K14/11;C07K1/00
• 代理公司: 廣州市越秀區(qū)哲力專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 44288
• 代理人: 湯喜友

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及獸用生藥制品，具體涉及一種禽流感血凝素抗原保護(hù)劑及提高胚液中禽流感血凝素穩(wěn)定性的方法。

背景技術(shù)

禽流感是一種由A型流感病毒引起的傳染性疾病綜合征，被國際獸疫局定為A類傳染病。按病原性的致病力，禽流感可分為高致病性、低致病性和非致病性三大類。非致病性禽流感不會(huì)引起明顯癥狀，僅使染病的禽鳥體內(nèi)產(chǎn)生病毒抗體。低致病性禽流感可使禽類出現(xiàn)輕度呼吸道癥狀，食量減少、產(chǎn)蛋量下降，出現(xiàn)零星死亡。高致病性禽流感最為嚴(yán)重，發(fā)病率和死亡率高。根據(jù)抗原的不同，我國商品化的禽流感疫苗分為H5亞型禽流感疫苗、H9亞型禽流感疫苗和H5-H9亞型二價(jià)禽流感疫苗三大類。

禽流感血凝素HA是禽流感病毒的主要抗原基因，也刺激禽類產(chǎn)生免疫保護(hù)的重要抗原。目前禽流感疫苗均是滅活疫苗，禽流感滅活疫苗免疫禽類之后，在臨床上評(píng)價(jià)免疫效果的重要方法就是測定抗血凝素HA特異性抗體的滴度。其方法是使用禽流感標(biāo)準(zhǔn)抗原中和血清中抗血凝素HA特異性抗體之后，測定剩余血凝素對(duì)雞紅細(xì)胞的凝集作用。因此，血凝素HA不論是對(duì)于禽流感疫苗還是對(duì)禽流感標(biāo)準(zhǔn)抗原都具有十分重要的作用。維持禽流感病毒血凝素HA的穩(wěn)定性具有重要意義。目前禽流感疫苗的半成品即含禽流感病毒的胚液在2℃-8℃保存時(shí)間不超過1個(gè)月，而禽流感病毒抗原保存在-20℃。國內(nèi)活疫苗的保護(hù)劑主要成分為脫脂牛奶、蔗糖、明膠等，保護(hù)劑組方簡單、配制簡便，抗原對(duì)溫度敏感，如果在2℃-8℃條件下，保存期只有4個(gè)月-6個(gè)月，多數(shù)疫苗需要在-15℃以下保存。另外我國也有不少關(guān)于活疫苗的耐熱保護(hù)劑的研究報(bào)道，而針對(duì)提高禽流感病毒血凝素HA穩(wěn)定性的研究還未見任何報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種禽流感血凝素抗原保護(hù)劑，用于保護(hù)胚液中的禽流感病毒血凝素，極大的提高了胚液中禽流感病毒血凝素的穩(wěn)定性，延長其保存期限。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種提高胚液中禽流感血凝素穩(wěn)定性的方法，添加本發(fā)明的禽流感病毒血凝素保護(hù)劑，達(dá)到延長胚液中的禽流感病毒血凝素的保存期限。

為實(shí)現(xiàn)上述目的本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：

一種禽流感血凝素抗原保護(hù)劑，其是由以重量百分比計(jì)的以下組分配制而成：

甘氨酸0.5-1%????????異亮氨酸0.5-3%????????絲氨酸0-7%

丙氨酸0.5-1%????????苯丙氨酸1-5%??????????酪氨酸0-6%

纈氨酸1-2%??????????脯氨酸1-6%????????????半胱氨酸0.5-8%

亮氨酸0-3%??????????色氨酸0.5-4%??????????蛋氨酸0.5-5%

天冬酰胺0.5-4%??????谷氨酰胺0.5-5%????????蘇氨酸0-3%

天冬氨酸0.5-6%??????谷氨酸0-0.5%??????????賴氨酸0.5-2%

精氨酸1-10%?????????組氨酸0-5%????????????亞精胺1-20%

精胺0-10%；?????????葡萄糖0.5-20%?????????果糖5-40%

蔗糖????????????????乳糖2-30%?????????????白蛋白5-30%

甘油1-30%??????????明膠0-20%???????????葡聚糖0-2%；

各組分的重量百分比之和為100%。

一種提高胚液中禽流感血凝素穩(wěn)定性的方法，其包括以下步驟：

1）按照權(quán)利要求1的配方配制禽流感血凝素抗原保護(hù)劑；

2）在滅活的含有禽流感血凝素胚液中加入禽流感血凝素抗原保護(hù)劑，并混合均勻；

3）將步驟2）處理后的混合液中加入0.1-0.3ml甲醛溶液，并混合均勻；

4）在步驟3）處理后的混合液中加入粉末型PBS緩沖對(duì)使PBS緩沖鹽濃度達(dá)到0.8-1.2mM/L，混勻；

5）將步驟4）處理后的混合液置于35-40℃的培養(yǎng)箱中保存即可。

本發(fā)明優(yōu)選的方案中，步驟2）按照100ml禽流感胚液中加入8-12g禽流感血凝素抗原保護(hù)劑混合均勻。較佳的方案中，按照100ml禽流感胚液中加入10g禽流感血凝素抗原保護(hù)劑混合。

本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的方案中，步驟4）中控制混合液的pH值為7.0-7.4。因?yàn)榍萘鞲醒耗卦趐H較低時(shí)降解速度比較快，因此當(dāng)維持pH值在上述范圍之內(nèi)有利于其保存。