[發明專利]一種石斛多糖含量的測定方法及其應用

有效

• 申請號: 201210488832.3
• 申請日: 2012-11-26
• 公開（公告）號: CN102928373A
• 公開（公告）日: 2013-02-13
• 發明（設計）人: 王再花;朱根發;葉慶生;章金輝;操君喜;孫延東
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院花卉研究所;華南師范大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/28
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉

技術領域

本發明屬于中藥及其提取物的化學分析技術領域，特別涉及一種石斛多糖含量的測定方法及其應用。

背景技術

多糖（polysaccharide）由多個單糖分子縮合、失水而成，是一類分子結構復雜且龐大的糖類物質，其相對分子質量從幾萬到幾千萬不等。多糖在自然界分布極廣，亦很重要，有的是構成動植物骨架結構的組成成分，如纖維素；有的是作為動植物儲藏的養分，如糖原和淀粉；有的具有特殊的生物活性，像人體中的肝素有抗凝血作用，肺炎球菌細胞壁中的多糖有抗原作用。近年來多糖研究越來越深入，逐漸成為生命科學研究的前沿。

多糖的測定方法有很多種，如斐林法、蒽酮-硫酸法、高效液相色譜法、毛細管電泳法、酶法和苯酚-硫酸法等，各測定方法有各自的優點和缺點，如毛細管電泳法和高效液相色譜法精密度較高但需要多糖純品，對測定樣品的要求高，成本較高；蒽酮-硫酸法和苯酚-硫酸法等測定多糖時蛋白的干擾比較明顯。由于苯酚-硫酸法操作簡便，精確度較好，是目前多糖測定中較常使用的一種方法。

石斛是我國名貴的中藥材，最早記載于《神農本草經》，被列為上品，具有滋陰清熱、生津益胃、強身等功效。石斛多糖是石斛的主要藥效成分之一，有抗腫瘤、降血糖、抗衰老和增強免疫等作用。石斛精多糖的獲得是一個非常復雜的過程，需要經過熱水浸提、粗多糖提取以及蛋白去除等步驟，其中制備1g精多糖需要耗費500g左右鮮石斛，傳統的制備及測定方法具有耗時、耗力和耗材的缺點。

發明內容

本發明的首要目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種石斛多糖含量的測定方法。

本發明的另一目的在于提供所述石斛多糖含量的測定方法的應用。

本發明的目的通過下述技術方案實現：一種石斛多糖含量的測定方法，包括以下步驟：

標準曲線的制備：分別吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、2.0ml的0.05mg·mL^-1的葡萄糖標準液，各加蒸餾水補至2.0ml，然后各加6wt%重蒸苯酚1.0ml，搖勻后加入98wt%濃硫酸5.0ml，搖勻，靜置5min后置沸水浴中加熱20min，冷卻至室溫，于490nm處測定吸光度；以吸光度為縱坐標、葡萄糖濃度為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程；

換算因子（f）的測定：取50μg·ml^-1石斛精多糖溶液0.05～1ml，加蒸餾水補足至2.0ml，各加6wt%重蒸苯酚溶液1.0ml，搖勻后加入98wt%濃硫酸5.0ml，搖勻，靜置5min后置沸水浴中加熱20min，冷卻至室溫，于490nm處測定吸光度，根據回歸方程計算石斛精多糖溶液的濃度；計算換算因子f：f＝Cs/C，其中，Cs為石斛精多糖溶液的實際濃度，C為回歸方程計算石斛精多糖溶液的濃度；

石斛樣品溶液中石斛多糖含量的測定：吸取石斛樣品溶液0.05～1ml，各加蒸餾水補至2.0ml，然后各加6wt%重蒸苯酚1.0ml，搖勻后加入98wt%濃硫酸5.0ml，搖勻，靜置5min后置沸水浴中加熱20min，冷卻至室溫，于490nm處測定吸光度，由回歸方程計算石斛樣品溶液中石斛多糖的濃度，由下述公式計算石斛樣品溶液中石斛多糖含量（X）：X=f×C’×D×100%/W；

式中：f-換算因子（即石斛多糖相當于葡萄糖的校正系數），C’--由回歸方程得到的石斛樣品溶液中的葡萄糖含量，D--樣品（石斛干燥粉末）測定中的稀釋倍數，W--石斛干燥粉末的質量；

所述的石斛樣品溶液優選采用以下方法進行制備：將石斛粉末按質量體積比1g/100～150ml加入80wt%乙醇中（即1g石斛粉末加入100～150ml?80wt%乙醇），80～90℃回流提取2～3次，每次0.5～1h，抽濾后取濾渣；往濾渣中按質量體積比1g/100～150ml加入蒸餾水（即1g濾渣加入100～150ml蒸餾水），80～90℃回流提取2～3次，每次0.5～1h，抽濾后取濾液，合并濾液，用蒸餾水定容至50mL，搖勻，得到石斛樣品溶液；

所述的石斛粉末優選為過60目篩的干燥石斛粉末；

所述的石斛精多糖溶液優選采用以下方法進行制備：取石斛精多糖，加蒸餾水配制成50μg·ml^-1的石斛精多糖溶液；

所述的石斛精多糖優選采用以下方法進行制備：