[發(fā)明專(zhuān)利]共固定化葡萄糖氧化酶/過(guò)氧化氫酶微球及其在生產(chǎn)葡萄糖酸或其鹽中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210488451.5
• 申請(qǐng)日: 2012-11-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102943069A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-02-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 譚天偉;陳文;葛春玲;陳必強(qiáng)
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京化工大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N11/08
• 分類(lèi)號(hào): C12N11/08;C12P7/58
• 代理公司: 北京五月天專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 11294
• 代理人: 涂蕭愷

1.一種共固定化葡萄糖氧化酶/過(guò)氧化氫酶微球，其通過(guò)包括如下步驟的方法所制備而成：?

（1）以具有大孔結(jié)構(gòu)PGMA微球?yàn)檩d體，所述的微球的平均孔徑介于100-200nm之間，以1-5%（v/v）乙二胺溶液為氨基化試劑，按載體質(zhì)量：氨基化試劑體積1:40將載體分散于氨基化試劑中，在pH7-9，40-80℃下振蕩反應(yīng)1-6h，收集氨基化載體；

（2）按照葡萄糖氧化酶：過(guò)氧化氫酶的活力比為1:1-6的比例，將GOD和CAT溶解于pH5-8的磷酸緩沖液中；在酶溶解液中加入碳二亞胺以及的N-羥基琥珀酰亞胺，0-8℃下反應(yīng)15-60min，然后將氨基化載體分散于酶液中，25-35℃下攪拌反應(yīng)1-10h；

（3）在步驟（2）反應(yīng)液中加入1-5倍反應(yīng)液體積的丙酮和0.1-2.0%（v/v）交聯(lián)劑，繼續(xù)反應(yīng)0.5-1.5h，將上述反應(yīng)液進(jìn)行過(guò)濾，棄濾液，收集固形物，用磷酸緩沖液或水洗滌3-5次，干燥得到共固定化葡萄糖氧化酶/過(guò)氧化氫酶微球。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共固定化葡萄糖氧化酶/過(guò)氧化氫酶微球，所述的交聯(lián)劑選自戊二醛、香草醛等二醛類(lèi)交聯(lián)劑。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的共固定化葡萄糖氧化酶/過(guò)氧化氫酶微球，所述的大孔結(jié)構(gòu)PGMA微球是通過(guò)如下方法得到，所述的方法包括如下步驟：用于固定化酶的樹(shù)脂為大孔GMA樹(shù)脂，通過(guò)懸浮聚合即可得到，通過(guò)控制致孔劑和交聯(lián)劑的用量來(lái)控制微球孔徑的大小，樹(shù)脂微球粒徑的大小通過(guò)轉(zhuǎn)速來(lái)調(diào)節(jié)。

4.權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的共固定化葡萄糖氧化酶/過(guò)氧化氫酶微球的應(yīng)用，所述的應(yīng)用為用于固定化酶催化氧化葡萄糖生產(chǎn)葡萄糖酸或其鹽。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，所述的催化氧化過(guò)程包括如下步驟：將葡萄糖溶液，成鹽試劑和共固定化葡萄糖氧化酶/過(guò)氧化氫酶微球加入帶攪拌設(shè)備的反應(yīng)容器中，反應(yīng)溫度32-40℃，pH?5.5～7.5，通風(fēng)?1:0.14～0.15（v/v/h）（誰(shuí)的體積比上誰(shuí)的體積）；氧化時(shí)間12～20小時(shí)，，殘?zhí)堑陀?.3%時(shí)終止反應(yīng)。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，所述的步驟還包括在氧化反應(yīng)結(jié)束后回收共固定化葡萄糖氧化酶/過(guò)氧化氫酶微球，重復(fù)使用，優(yōu)選的，共固定化葡萄糖氧化酶/過(guò)氧化氫酶微球的重復(fù)使用次數(shù)在15次以上。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，所述的成鹽試劑選自碳酸鈣、碳酸鎂、氫氧化鋅。