[發明專利]豬偽狂犬病病毒強毒株、其基因缺失疫苗株及其應用

有效

• 申請號: 201210486730.8
• 申請日: 2012-11-26
• 公開（公告）號: CN102994458A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 田志軍;彭金美;安同慶
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N7/01;A61K39/245;A61P31/20;G01N33/569;C12R1/93
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;韓小雷

技術領域

本發明涉及一株病毒強毒株以及在其基礎上獲得的基因缺失疫苗株，尤其涉及一株豬偽狂犬病病毒強毒株HeN1、由該強毒株HeN1缺失gE基因獲得的基因缺失疫苗株rPRV-gE^--EGFP⁺，本發明還涉及HeN1和疫苗株rPRV-gE^--EGFP⁺在預防或治療豬偽狂犬病中的應用，本發明屬于生物醫藥領域。

背景技術

偽狂犬?。≒seudorabies，PR又名Aujeszky's?disease，AD)是由偽狂犬病病毒(Pseudorabies?Virus，PRV)引起的多種家畜、野生動物、伴侶動物和實驗動物的一種急性傳染病。在自然條件下，本病最常見于豬、牛、羊、犬、貓和鼠類。偽狂犬病病毒除對豬以外，對所有易感動物都是致死性病程。對豬主要表現為神經癥狀、流涎、呼吸困難、繁殖障礙、生長停滯、失重及高死亡率。哺乳仔豬感染偽狂犬病的臨床表現最為典型、嚴重和一致，均出現神經癥狀、麻痹、衰竭死亡，死亡率幾乎高達100%；隨著年齡增長死亡率逐漸下降，成豬僅為2%，但一般情況下成豬感染不發病，而呈隱形經過，僅見打噴嚏、咳嗽、體溫升高等輕微癥狀；妊娠母豬感染偽狂犬病毒可引起流產、死胎、產弱仔和木乃伊化胎兒；對公豬可引起睪丸鞘膜炎。該病具有高度的傳染性，一旦在豬群中發現，將很快通過空氣和接觸經呼吸道傳播給其他豬只和豬場，近來的研究表明偽狂犬病病毒還可以通過乳汁和生殖道感染。

在規?；i場，PR是常規免疫防控對象。利用強弱毒鑒別ELISA進行的血清流行病學調查發現，基因缺失疫苗免疫后仍有一定比例的豬場和豬只存在野毒抗體，并偶有病毒分離的報道。由于造成的經濟損失有限，并未引起足夠重視。但近一年來，有多個使用常規疫苗免疫的規?；i場出現了疑似PR流行的現象，主要表現為母豬產弱仔、死胎，仔豬出現神經癥狀及死亡等。將送檢的組織進行PCR鑒定和病毒分離，證明豬場確實存在PRV野毒感染。目前本實驗室已經從河南、黑龍江、吉林、遼寧、內蒙古等省豬場送檢的病料中檢測到PRV野毒。由于PRV基因組較大，約145kb，我們從各豬場送檢樣品中通過PCR擴增PRV的gE基因進行了測序，結果表明各豬場流行毒株的這兩個基因高度同源，同源性在99%以上，與PRVKaplan株（匈牙利，GenBank登錄號JQ809328）同源性最低，為97.5%。

免疫接種是防控PRV的最有效方法。我國于上世紀70年代從匈牙利引進了PRVBartha?k61株，該病毒是世界上公認的優良疫苗株，國內規?；i場大都應用該疫苗，PR也得到了很好的控制。但現在的情況是，PR發病豬場都按照常規程序免疫過該疫苗，是否新流行毒株存在抗原變異導致免疫豬不能有效抵抗該病毒？我們利用血清中和試驗和綿羊的免疫接種試驗證實，Bartha?k61免疫豬產生的中和抗體不能有效中和新分離病毒，而且免疫Bartha?k61的綿羊也不能完全抵抗新病毒的攻擊。因此急需開發新的安全有效的PRV疫苗以應對新流行的毒株。

發明內容

本發明目的之一是提供一株豬偽狂犬病病毒強毒株。

本發明目的之二是提供一株由該豬偽狂犬病病毒強毒株經基因工程方法缺失gE基因并插入EGFP標記的弱毒疫苗株，用該弱毒疫苗株所制備的疫苗對于PRV新流行毒株具有良好的保護效力。

本發明目的之三是提供一種預防或治療豬偽狂犬病的疫苗組合物。

本發明的上述目的分別是通過以下技術方案來實現的：