[發明專利]一種α-氨基酸酯水解酶固定化方法有效
| 申請號： | 201210484995.4 | 申請日： | 2012-11-26 |
| 公開（公告）號： | CN103834633A | 公開（公告）日： | 2014-06-04 |
| 發明（設計）人： | 李端華;李進軍;葉麗娟;潘佳林;王輅 | 申請（專利權）人： | 中國醫藥集團總公司四川抗菌素工業研究所 |
| 主分類號： | C12N11/08 | 分類號： | C12N11/08;C12N9/18;C12R1/19 |
| 代理公司： | 成都睿道專利代理事務所(普通合伙) 51217 | 代理人： | 陶紅 |
| 地址： | 610052 四川省成都*** | 國省代碼： | 四川;51 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 氨基酸 水解 固定 方法 | ||
1.一種α-氨基酸酯水解酶固定化方法，按如下步驟進行：
（1）發酵含有重組質粒pET28a-aeh的大腸桿菌BL21(DE3)，離心分離獲得菌體；
（2）將菌體用溶菌酶、DNA酶和RNA酶處理，離心分離獲得無細胞裂解液；
（3）通過鹽析初步去除沉淀雜蛋白和沉淀目的蛋白；
（4）將所獲得粗酶和處理后的載體按照一定的比例加入含有鹽的溶液中，控制體系的溫度和pH，進行固定化反應，反應一定時間后，取出用去離子水洗滌至洗滌流出液無酶活力，抽濾去水，獲得固定化的α-氨基酸酯水解酶。
2.如權利要求1所述的固定化方法，其特征在于，鹽析操作中使用的鹽為硫酸銨，其質量百分比濃度為從10%-50%。
3.如權利要求1所述的固定化方法，其特征在于，細胞裂解液為大腸桿菌細胞經過溶菌酶處理后經低溫高速離心后所得的上清液。
4.如權利要求1所述的固定化方法，其特征在于，所使用的載體為含有環氧基活性基團的圓珠狀聚合物，其粒徑為150μm---300μm，環氧官能團容量不低于50μmol/g，含水量40-70%。
5.如權利要求1所述的固定化方法，其特征在于，其固定化反應溫度為10℃---35℃，固定化反應攪拌速度為100r/min--300r/min。
6.如權利要求5所述的固定化方法，其特征在于，其固定化反應溫度為10℃-25℃，固定化反應攪拌速度為150?r/min-230?r/min。
7.如權利要求1所述的固定化方法，其特征在于，固定化反應在一定濃度的鹽溶液中進行，所用的鹽包括陰離子為硫酸根、硝酸根、氯離子、乙酸根、碳酸根、碳酸氫根、磷酸根、磷酸一氫根、磷酸二氫根；陽離子包括銨離子、?鉀離子、鈉離子、鎂離子、鈣離子、鋁離子。
8.如權利要求7所述的固定化方法，其特征在于，所用的鹽濃度0.1mol/L---2.5mol/L。
9.如權利要求1所述的固定化方法，其特征在于，固定化反應體系酶與載體的比例按照QE值范圍為100---1000加入，QE值為200---800，固定化反應體系的pH為5.0---9.0。
10.如權利要求9所述的固定化方法，其特征在于，固定化反應體系酶與載體的QE值為300---700，固定化反應體系的pH為6.0—7.0。?
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于中國醫藥集團總公司四川抗菌素工業研究所，未經中國醫藥集團總公司四川抗菌素工業研究所許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201210484995.4/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
