[發明專利]與大豆抗疫霉根腐病候選基因RpsWD15-2共分離的分子標記及其應用

無效

• 申請號: 201210484859.5
• 申請日: 2012-11-23
• 公開（公告）號: CN102965369A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: 朱振東;張吉清;王曉鳴;夏長劍;段燦星
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院作物科學研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

1.與大豆抗疫霉根腐病候選基因RpsWD15-2共分離的分子標記，其特征在于，所述候選基因RpsWD15-2位于大豆第17號染色體上，且位于標記Sattwd15-24/25和Sattwd15-47之間，與這兩個標記的遺傳距離分別為0.5cM和0.8cM；

所述分子標記為Sattwd15-32，含重復基序(AAC)6，且用于擴增分子標記Sattwd15-32的特異性PCR引物對為：

上游引物F：5′-ATCCCTTATTCCCTTCAT-3′和

下游引物R：5′-CATAGACCTCCTTCCAAA-3′。

2.根據權利要求1所述的分子標記，其特征在于，PCR擴增使用的退火溫度為47℃，擴增產物大小為149bp。

3.根據權利要求1所述的分子標記，其特征在于，所述候選基因RpsWD15-2的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

4.用于檢測與大豆抗疫霉根腐病候選基因RpsWD15-2共分離的分子標記Sattwd15-32的PCR引物對，其特征在于，包括：

上游引物F：5′-ATCCCTTATTCCCTTCAT-3′和

下游引物R：5′-CATAGACCTCCTTCCAAA-3′。

5.權利要求1所述與大豆抗疫霉根腐病候選基因RpsWD15-2共分離的分子標記在鑒定抗疫霉根腐病大豆品種中的應用，其包括步驟：

1）提取待測大豆的基因組DNA；

2）以待測大豆的基因組DNA為模板，利用權利要求4所述引物F和R，進行PCR擴增反應；

3）檢測PCR擴增產物，如果能夠擴增出149bp的產物，則判定為抗疫霉根腐病大豆品種。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，步驟2）中PCR反應使用的擴增體系以20μl計為：大豆基因組DNA模板濃度2ng/μL，10×PCR緩沖液2.5μl，四種dNTP濃度各為20μmol/L，上、下游引物濃度各為0.2μmol/L，Taq?DNA聚合酶0.5U，用ddH₂O補足至20μl。

7.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，步驟2）中PCR反應使用的條件為：95℃3分鐘；94℃50秒，47℃50秒，72℃50秒，35個循環；72℃10分鐘。

8.含有權利要求4所述引物對的用于檢測抗疫霉根腐病大豆的試劑盒。

9.根據權利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括dNTPs、Taq?DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反應緩沖液、標準陽性模板中的一種或多種。

10.權利要求1所述與大豆抗疫霉根腐病候選基因RpsWD15-2共分離的分子標記在大豆抗疫霉根腐病分子育種中的應用。