[發明專利]一種三角帆蚌的可溶性腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體基因、蛋白及其抗體的制備方法

無效

• 申請號: 201210480470.3
• 申請日: 2012-11-23
• 公開（公告）號: CN102965379A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: 楊受保
• 申請（專利權）人: 紹興文理學院
• 主分類號: C12N15/28
• 分類號: C12N15/28;C07K14/525;C07K16/24;C07K16/06
• 代理公司: 紹興市越興專利事務所 33220
• 代理人: 蔣衛東

1.一種三角帆蚌的可溶性腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體基因，其特征在于：具有SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列。

2.一種三角帆蚌的可溶性腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體蛋白質，其特征在于：具有SEQ?ID?NO.2?所示的氨基酸序列。

3.一種如權利要求1所述的三角帆蚌的可溶性腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體的抗體的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

1）以三角帆蚌血淋巴細胞的總RNA為模板，反轉錄成cDNA，擴增sTRAIL蛋白基因的寡聚核苷酸引物,所述的引物具有SEQ?ID?NO.3?所示的核苷酸序列的，利用PCR技術獲得具有SEQ?ID?NO.1所示的sTRAIL的基因編碼框核苷酸序列；

2）利用DNA重組技術將sTRAIL基因編碼框的序列片段克隆到合適的pMD19-T載體中，再經限制性內切酶酶切，與經同樣酶切的pET-28(a)?原核表達載體連接，利用PCR法篩選陽性克隆，經測序鑒定獲得編碼框正確的重組表達載體pET-28a(+)-sTRAIL；

3）將陽性重組質粒pET-28(a)-?sTRAIL轉化到表達宿主菌E.?coli?Rossetta（DE3?），用異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）誘導表達，通過SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）進行檢測；

4）將陽性表達菌液擴大培養，利用蛋白質純化試劑盒分離純化重組蛋白質，制得的重組蛋白質具有SEQ?ID?NO.2?所示的氨基酸序列；

5)用純化得到sTRAIL重組蛋白免疫新西蘭大白兔，經過一次初始免疫和三次加強免疫后，頸動脈取血，分離血清，獲得sTRAIL多克隆兔抗血清。