[發明專利]一種滅活疫苗中CA16抗原免疫原性的檢測方法

有效

• 申請號: 201210480431.3
• 申請日: 2012-11-23
• 公開（公告）號: CN103830748A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發明（設計）人: 王巍巍;李雅靜;高強;姜德玉;尹衛東
• 申請（專利權）人: 北京科興生物制品有限公司
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

技術領域

本發明涉及疫苗免疫技術領域，具體地說，涉及一種滅活疫苗中CA16抗原免疫原性的檢測方法。

背景技術

手足口病是由腸道病毒引起的傳染病，世界大部分地區均有此病流行的報導。腸道病毒EV71和柯薩奇病毒Cox?A16（簡稱CA16）感染交替出現，成為手足口病的主要病原體。

近年來，我國手足口病疫情日益嚴重，發病、重癥和死亡病例呈逐年上升趨勢，2008年全國共報道手足口病例489,073例，死亡126例；2009年報告發病1,155,525例，死亡353例；2010年報告發病1,774,669例，死亡905例；2011年報告發病1,638,743例，死亡506例。其中重癥和死亡病例主要由EV71病毒感染引起，死者年齡通常為0.5-3歲，病程僅2天。該病已嚴重危及我國人民，特別是嬰幼兒人群的健康和生命，給社會帶來了巨大的疾病負擔，我國于2008年5月2日將其列入丙類傳染病。

雖然重癥和死亡病例主要由EV71病毒感染引起，但值得關注的是CA16與心肌炎、心包炎、難治性休克等綜合性疾病相關，且在部分地區成為手足口病優勢病原。此外，衛生部相關數據顯示，上一年流行CA16的地區，第二年流行EV71時的報告病例數、重癥和死亡病例數均明顯增加，提示二者可能存在協同關系。柯薩奇病毒(Coxasckie?virus)A16型(Cox?A16,CA16)是小RNA病毒科的單股正鏈RNA病毒，呈20面立體對稱球形，直徑約23-30nm。主要經糞-口、呼吸道和密切接觸傳播，可通過胎盤傳給胎兒引起宮內感染。早期發現的手足口病的病原體主要為Cox?A16型，20世紀70年代后，與EV71感染交替出現，成為手足口病的主要病原體。我國北京、福建、天津、吉林、山東、廣東、深圳、浙江、四川、安徽等多個省份均有報道。目前尚無CA16病毒疫苗的報道，因此開展CAl6病毒滅活疫苗的臨床前研究并有效評價其免疫原性是十分必要的，但如何有效地評價CAl6病毒滅活疫苗的免疫原性，至今未有其方法的報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種滅活疫苗中CA16抗原免疫原性的檢測方法。

本發明提供的滅活疫苗中CA16抗原免疫原性的檢測方法，是將含CA16抗原的滅活疫苗免疫大鼠，通過測定大鼠血清的中和抗體效價來檢測CA16病毒滅活疫苗免疫原性。

所述大鼠為Wistar大鼠、SD大鼠或Brown?Norway大鼠。

本發明方法中，免疫途徑為腹腔注射、肌肉注射或皮下注射。其中，免疫劑量為每次每只大鼠注射含25~1600UCA16抗原的滅活疫苗。

其中，免疫程序為0天、14天分別免疫2次，第28天采血，分離血清，采用常規的微量中和法測定血清的中和抗體效價。

具體步驟如下：將血清倍比稀釋，CA16病毒（購自ATCC，100CCID₅₀/0.05ml）與不同稀釋度的血清于37℃中和反應后接種敏感細胞（Vero/RD細胞，來源于ATCC），根據細胞的感染情況判定血清中和抗體的效價，計算各組血清的GMT（幾何平均值）。

本發明方法也可選用以下免疫程序：免疫程序為0天、14天、28天分別免疫3次，第42天采血，測定血清的中和抗體效價。

本發明所述的滅活疫苗，其佐劑為氫氧化鋁。

進一步地，本發明提供了CA16病毒滅活疫苗免疫原性的檢測方法，將CA16病毒滅活疫苗免疫Wistar大鼠、SD大鼠或BrownNorway大鼠，免疫途徑為腹腔注射、肌肉注射或皮下注射，免疫劑量為每次每只大鼠注射含25~1600U?CA16抗原的滅活疫苗；免疫程序為0天、14天分別免疫2次，第28天采血，或0天、14天、28天分別免疫3次，第42天采血，測血清的中和抗體效價。

本發明還提供了一種CA16病毒免疫原性的檢測方法，將CA16病毒接種大鼠，通過測定大鼠血清的中和抗體效價來檢測CA16病毒的免疫原性。

進一步地，檢測CA16病毒免疫原性的方法為將CA16病毒接種Wistar大鼠、SD大鼠或Brown?Norway大鼠，接種途徑為腹腔注射、肌肉注射或皮下注射；免疫程序為0天、14天分別免疫2次，第28天采血，或，在第0天、14天、28天分別免疫3次，第42天采血，測血清的中和抗體效價。

上述免疫劑量，本領域技術人員可根據實驗大鼠的性別、重量、日齡結合現有技術進行常規選擇。

對于血清中和抗體效價，通常情況下本領域技術人員認為抗體水平不低于1:40則認為產生有保護性的抗體，也即免疫原具有較好的免疫原性。