[發明專利]一種三倍體石斑魚的制備方法

有效

• 申請號: 201210480124.5
• 申請日: 2012-11-22
• 公開（公告）號: CN103004653A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 張勇;黃文;張海發;王韋民;李水生;王燕;肖玲;劉曉春;林浩然
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: A01K61/00
• 分類號: A01K61/00
• 代理公司: 廣州知友專利商標代理有限公司 44104
• 代理人: 宣國華

技術領域

本發明屬于魚類遺傳育種領域，具體涉及一種三倍體石斑魚的制備方法。

背景技術

石斑魚類隸屬鱸形目(Perciformes)，鮨科(Serranidae)，石斑魚亞科（Epinephelinae），是聞名世界的名貴魚類，其營養豐富，是一種含低脂肪、高蛋白的上等食用魚，深受廣大消費者喜愛。在我國南方沿海廣東、海南、福建、廣西等地石斑魚已成為海水養殖的主要對象，經濟價值巨大。

三倍體是指具有三套染色體組的個體，正常的個體只具有兩套染色體組。三倍體個體生殖原細胞在減數分裂過程中不能正常的聯會，不能產生正常的配子，在三倍體個體發育過程中，性腺的不正常發育節省了生殖能量并將這部分能量用于生長發育，再加上三倍體個體比二倍體多了一套染色體組，基因表達更加活躍加快了生長發育的進程，使得三倍體在生長發育速度方面具有非常明顯的優勢，具有巨大的應用價值。

目前，傳統石斑魚的育種方法育種工作年限長、育種工作進展緩慢且石斑魚雜交育種模式中雜交二倍體容易發生逃逸，從而對海洋生態環境造成無法預估的嚴重后果。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種三倍體石斑魚的制備方法，該制備方法育種周期短、生長速度快、對海洋生態環境無影響。

本發明的上述技術問題是通過如下技術方案來實現的：一種三倍體石斑魚的制備方法，包括以下步驟：挑選遺傳距離為0.140-0.145親緣關系的不同種石斑魚作為親魚，采用干法人工受精進行遠緣雜交，卵子受精后轉移到海水中進行冷休克處理，育苗經起捕、馴養后鑒定出三倍體石斑魚即可。

本發明通過遠緣雜交配合物理刺激產生出三倍體石斑魚，大大加快了石斑魚多倍體育種工作的進程。

本發明所述的石斑魚優選鞍帶石斑魚（E.lanceolatus）和斜帶石斑魚（E.coioides）。

本發明優選采用干法人工受精進行遠緣雜交時的溫度為25~28℃。

本發明在卵子受精后轉移到海水中進行冷休克處理，冷休克處理時的溫度優選為4℃，冷休克處理時間優選為20~25min。

本發明育苗經起捕、馴養長至8~9個月齡后鑒定出三倍體石斑魚即可。

本發明育苗經起捕、馴養后采用倍性分析儀檢測血細胞倍性，并進行染色體核型分析以及血細胞大小測量從而鑒定出三倍體石斑魚。

可以采用血細胞涂片法測量血細胞大小。

與現有技術相比，本發明具有如下優點：

(1)本發明挑選遺傳距離為0.140-0.145親緣關系的不同種石斑魚作為親魚，在雜交后進行冷處理，可以得到三倍體石斑魚。本發明操作簡單，制備出的三倍體石斑魚生長速度快，不能繁殖，對海洋生態環境無影響；

(2)本發明加快了石斑魚類遺傳育種研究的進程，為以后的海水魚類多倍體遺傳育種研究提供重要依據；在生產應用方面具有巨大的經濟價值；在石斑魚類遺傳育種、遺傳進化以及內分泌調控等理論研究方面都具有重大的參考價值。

附圖說明

圖1-2是實施例1中的染色體圖進行核型分析結果圖。

具體實施方式

以下各實施例中所采用的試劑，如無特殊說明，均為市售。

實施例1

通過PCR擴增出中國近海石斑魚5種石斑魚線粒體細胞色素b（Cyt?b）基因，利用MEGA3.1軟件并根據Kimura雙參數模型計算遺傳距離。石斑魚具體種類如下：赤點石斑魚（E.akaara）、褐點石斑魚（E.fuscoguttatus）、鞍帶石斑魚（E.lanceolatus）、斜帶石斑魚（E.coioides）和豹紋鰓棘鱸（P.leopardus）。挑選健康石斑魚作為雜交親魚。

表1PCR擴增石斑魚線粒體細胞色素b（Cyt?b）基因引物序列如下

表2十三種石斑魚類種間的遺傳距離

繁殖期前1~2個月，挑選色澤鮮艷、體表無損傷、鰓絲鮮紅無寄生蟲、健康的的雌性斜帶石斑魚和雄性鞍帶石斑魚作為親魚，遺傳距離為0.14419，專池投喂精細餌料為親魚提供優良的營養，增強親魚的體質以便得到質量好的配子，期間密切注意親魚池中水的溫度和鹽度，注意親魚的攝食及生活狀態以便保持親魚在最佳的狀態進入繁殖期。