[發明專利]粒狀淡紫擬青霉生物殺線蟲劑的制備方法

有效

• 申請號: 201210480113.7
• 申請日: 2012-11-22
• 公開（公告）號: CN102960369A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: 梁洪柱;田會鵬;陳倩;李學燕
• 申請（專利權）人: 北京市西山試驗林場
• 主分類號: A01N63/04
• 分類號: A01N63/04;A01P5/00
• 代理公司: 北京慶峰財智知識產權代理事務所(普通合伙) 11417
• 代理人: 劉元霞

技術領域

本發明涉及一種生物殺線蟲劑的制備方法，特別是淡紫擬青霉生物殺線蟲劑的制備方法，屬于淡紫擬青霉生物殺線蟲劑制備領域。

背景技術

在引起植物侵染性病害的四大病原中，植物寄生線蟲的危害超過細菌和病毒，僅次于真菌病害。植物寄生線蟲每年造成世界農業生產的損失約1000億美元，其中根結線蟲（Meloidogyne?spp.）是危害最大的一類植物寄生線蟲，每年僅對世界上重要的經濟作物造成的經濟損失就高達數百億美元。在根結線蟲屬（Meloidogyne）內，以南方根結線蟲（M.incognita）、花生根結線蟲（M.arenaria）、爪哇根結線蟲（M.javanica）和北方根結線蟲（M.hapla）四個種的根結線蟲病害發生最為普遍，對大多數的糧食作物、油料作物、纖維作物、煙草、茶葉、果樹、蔬菜、藥材和花卉等均可造成嚴重損失。

在控制該類病害的方法中，由于根結線蟲通常存活于土壤中和植物根內，所以一般化學農藥難以控制其危害，劇毒農藥又對農產品生產的安全性構成嚴重威脅，而化學殺線蟲劑只能在短期內控制線蟲數量，同時還存在成本高、持效短和抗藥性等問題。此外，一些傳統的防治方法，如輪作、種植抗病品種等雖可起到一定的防治作用，但在實際生產中能夠輪作的作物并不多，對根結線蟲具有抗性的作物品種十分有限。因此，傳統控制方法并不能解決該類病害。

殺線蟲生物農藥由于其安全和高效而逐漸引起關注，具有非常廣闊的應用價值和市場前景。其中，淡紫擬青霉（P.lilacinus）是目前防治植物寄生線蟲的最有前途的天敵真菌之一，具有廣泛的研究和開發價值。淡紫擬青霉屬真菌門半知菌綱叢梗孢目，可寄生許多植物病原線蟲的卵及雌蟲，包括危害最為嚴重的根結線蟲（Meloidogyne?spp.）和胞囊線蟲（Heterodera?spp.），國際馬鈴薯中心昆蟲系Jatala博士1979年首次報道，淡紫擬青霉對南方根結線蟲的卵寄生率高達60%-70%。淡紫擬青霉菌株可在作物根際定殖，抵抗根際有害線蟲侵染，對作物根際土壤微生物菌群產生一定影響，利于植物生長發育。

雖然淡紫擬青霉的培養方法已經有較多研究，如中國專利CN101845398A中公開了一種淡紫擬青霉的培養方法，中國專利CN102286421A中公開了一種淡紫擬青霉的液體發酵培養方法，中國專利CN101671210A中公開了一種淡紫擬青霉生物肥藥的制備方法，CN101165016A中公開了一種防治線蟲危害的生物有機肥制備方法，CN1756482A中公開了一種粒狀殺線蟲劑的制造方法。但這些方法限于少量生產制備，規模化生產則受到限制。

發明內容

本發明為克服現有技術的不足，通過對淡紫擬青霉生物殺線蟲劑制備方法中各種工藝條件的選擇，提供一種可大規模生產淡紫擬青霉生物殺線蟲劑的方法，獲得的淡紫擬青霉生物殺線蟲劑的袍子產量高、生產成本低。

本發明通過如下技術方案實現：

一種粒狀淡紫擬青霉生物殺線蟲劑的制備方法，其包括如下步驟：準備菌株、制備菌種、第一次發酵、第二次發酵和造粒，其特征在于，所述制備菌種中采用的培養基的組成為蔗糖、酵母、MgSO₄、KCl、ZnSO₄·7H₂O和蒸餾水；所述第一次發酵中的培養基的組成為蔗糖、酵母、MgSO₄、KCl、ZnSO₄·7H₂O和蒸餾水；所述第二次發酵中的培養基的組成為蔗糖、酵母、MgSO₄、KCl、ZnSO₄·7H₂O和蒸餾水。

如上所述制備方法，所述制備菌種中采用搖瓶培養，其搖瓶裝量≤150ml/500ml瓶、搖床轉速為150rpm、培養溫度為29～30°C、時間為72h。

如上所述制備方法，所述第一次發酵中的發酵罐的接種量為4%體積比，發酵罐的裝罐系數為0.6-0.7、溫度為27-29°C、攪拌速度為200-300rpm，發酵周期為45-54小時。

如上所述制備方法，所述第二次發酵中的發酵罐的接種量為4%體積比，發酵罐的裝罐系數為0.6-0.7、溫度為27-29°C、攪拌速度為200-300rpm，發酵周期為42-50小時。

如上所述制備方法，所述制備菌種中的培養基的組成為蔗糖15g，酵母6.12g，MgSO₄?0.5g，KCl?0.5g，ZnSO₄·7H₂O?10mg和蒸餾水1000ml。所述培養基的pH優選為6.5。