[發明專利]一種落花生莖葉藥材的指紋圖譜建立方法

無效

• 申請號: 201210479915.6
• 申請日: 2012-11-22
• 公開（公告）號: CN103837627A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發明（設計）人: 張鐵軍;王麗莉;龔蘇曉;朱雪瑜;田成旺;廖茂梁;許浚;孫衛
• 申請（專利權）人: 天津藥物研究院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于藥物分析檢測領域，涉及一種落花生莖葉藥材的指紋圖譜建立方法，特別涉及河北產落花生莖葉藥材的高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜建立方法。

背景技術

中藥作為多組分復雜體系，其化學成分眾多，測定少數幾種有效成分或指標成分不足以確保藥材或制劑的質量，而宏觀地綜合分析已成為必然的趨勢，中藥指紋圖譜這一質量控制模式便順應了這個趨勢。

中藥指紋圖譜是指中藥材經過適當的處理后，采用一定的分析手段和儀器檢測得到的能夠標識其中各種組分群體特征的共有峰的圖譜，是以系統的化學成分研究和藥理學研究為基礎，經化學測定或基因鑒定得到的某種或某產地中藥及其制劑所共有的、具有特異性的組分群體（某類或數類成分）的特征圖譜或圖像。

中藥指紋圖譜能比較全面的反映中藥中所含化學成分的種類與數量，尤其是在現階段絕大多數有效成分沒有明確的情況下，雖然它不能代替含量測定，但它比測定任何單一成分所提供的信息都豐富，能更好地反映中藥的內在質量，大大提高中藥質量控制和評價的技術水平和科技含量，成為建立現代中藥質量標準體系的核心。

落花生莖葉收載于《湖南省中藥材標準》，為豆科落花生屬植物落花生Arachis?hypogaea?L.的干燥地上部分。本品味甘，性平。具有散瘀消腫，解毒，止汗的功效，用于治療跌打損傷，各種瘡毒和盜汗等癥。近年來隨著對其化學成分和藥理活性的深入研究，使得原本作為農作物廢棄物的落花生莖葉藥材得到了合理有效的利用，以落花生莖葉藥材為主要原料的制劑，如落花安神合劑、降壓避風片等被廣泛應用于臨床。

現有落花生莖葉藥材的質量標準僅從外觀性狀、簡單的薄層鑒別角度對其進行控制，顯然不能全面準確表征其內在質量。指紋圖譜作為中藥及其提取物成方制劑質量控制的最優方法，已被大家廣為采納。采用中藥指紋圖譜方式，一方面可以通過指紋圖譜的特征性有效的鑒別樣品的真偽和產地，另一方面通過對主要指紋圖譜特征峰的面積或比例的控制，能有效控制藥材的質量，確保其質量的均一和穩定，從而保證藥材的安全性和有效性。

發明內容

為了解決上述問題，本發明的目的是提供一種建立落花生莖葉藥材指紋圖譜的方法，該方法建立的指紋圖譜能夠全面表征落花生莖葉的藥物活性組分，從而表征和控制其內在質量。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的：

本發明提供了一種落花生莖葉藥材指紋圖譜的建立方法，所述方法包括采用高效液相色譜法檢測落花生莖葉藥材成分，其中，所述高效液相色譜法的條件包括：

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充材料；

流動相：流動相A為乙腈，流動相B為0.2%體積分數甲酸水溶液，進行梯度洗脫，所述梯度洗脫程序如下，其中流動相比例均為體積百分比：

0~15min，流動相A為0~5%，流動相B為100%~5%；

15~60min，流動相A為5%~30%，流動相B為95%~70%；

60~80min，流動相A為30%~50%，流動相B為70%~50%；

80~100min，流動相A為50%~100%，流動相B為50%~0%。

優選地，所述高效液相色譜法的條件還包括：

流速：1.0mL/min；

柱溫：30℃；

檢測波長：286nm；

理論塔板數按原兒茶酸峰計算，應不低于6000。

優選地，上述建立方法還包括通過以下步驟制備對照品溶液：取原兒茶酸對照品適量，加入甲醇溶解制成每1mL含0.1mg的溶液，作為對照品溶液。

并且，上述建立方法還包括通過以下步驟制備供試品溶液：取河北產落花生莖葉藥材1.0g，置于燒瓶錐形瓶中，加入70%體積分數甲醇水溶液100ml，超聲提取1h，提取液濃縮至干，用甲醇溶解轉移至10ml容量瓶中，用0.45μm濾膜濾過，棄去初濾液，取續濾液即得。

精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl注入高效液相色譜儀，根據以下色譜條件進行測定，得到指紋圖譜：

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充材料；Diamonsil鉆石1代C18，5μm，2.5×460mm；

流動相：流動相A為乙腈，流動相B為0.2%體積分數甲酸水溶液，進行梯度洗脫；

流速：1.0mL/min；

柱溫：30℃；

紫外檢測波長：286nm。

所述梯度洗脫程序如下，其中流動相比例均為體積百分比：