[發明專利]雙峰駝UCP2蛋白基因、重組蛋白及其克隆方法

無效

• 申請號: 201210478260.0
• 申請日: 2012-11-22
• 公開（公告）號: CN103014009A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 陳鋼糧
• 申請（專利權）人: 新疆旺源駝奶實業有限公司
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C07K14/47;C12N15/10
• 代理公司: 烏魯木齊合縱專利商標事務所 65105
• 代理人: 湯潔

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，是一種雙峰駝UCP2蛋白基因、重組蛋白及其克隆方法。

背景技術

解耦聯蛋白?2?(UCP2)是?1997?年發現的一種新的解偶聯蛋白?,它是線粒體內膜載體家族的一員。與其類似物UCP1相比?,UCP2?在棕色脂肪組織中含量較低?,但在體內分布廣泛?,因而引起人們的關注。UCP2的主要功能是控制?ATP?合成?,即通過介導線粒體質子泄漏?,將質子驅動中貯存的能量以熱能的形式釋放?,最終引起?ATP生成減少。此外?,UCP2?還可調節脂肪酸代謝、控制活性氧的產生。UCP2?在調節大腦功能?,抑制細胞死亡方面也起著重要作用。UCP2基因定位在與肥胖和高胰島素血癥顯示連環遺傳的染色體區1,UCP2在參與脂肪和能量代謝的組織中表達?,因此促使人們對其與代謝紊亂尤其是2型糖尿病的關系產生了興趣。

人UCP2基因定位于染色體?11q13。UCP2?基因結構于?1998?年闡明,?其蛋白由309?個氨基酸殘基組成，相對分子質量約為32k，理論的等電點為9.74。其序列與其類似物?UCP1?和UCP3分別有?59?%和?73?%的相似性。人?UCP2?基因與鼠相同?,均含8個外顯子和7個內含子?,分別跨越8和?6.?3?kb?長的區域。與其他線粒體載體家族成員相似?,UCP2有兩種轉運模式:一是利用對基質特異的載體?,另一種則是通過特異性較低的通道。

根據目前的研究?,若能提高?UCP2在特異組織中的表達?,可減少脂肪堆積而對抗肥胖?,對非乙醇性脂肪肝亦有保護作用?,同時也是一種簡單有效的減肥方法。若能選擇性減少β細胞中?UCP2的表達?,可成為防治?2型糖尿病的一個新的靶點。由于肥胖和?2型糖尿病是多基因作用的結果?,除?UCP2基因的效應外?,還應積極探索其它相關基因的作用?,以及這些基因是否與?UCP2基因有協同作用。

在動物方面UCP2基因遺傳變異方面的報道較少，至今尚未發現克隆獲得雙峰駝UCP2基因編碼蛋白序列以及對動物UCP2基因進化規律研究的報道。UCP2在能量代謝和脂肪酸代謝中有著關鍵的調控作用,因此,?通過對UCP2從基因、蛋白質和抑制劑等多方面的研究,?必然會為肥胖、胰島素抵抗綜合癥、Ⅱ型糖尿病等疾病的預防和治療帶來新的希望。雙峰駝有較強的耐旱和沉積脂肪能力，尤其是在水草充足的季節，駝峰能在短時間內沉積大量脂肪，很適合進行脂類和能量代謝研究。

發明內容

本發明提供了一種雙峰駝UCP2蛋白基因，該雙峰駝UCP2蛋白基因的重組蛋白編碼序列是一種在線粒體中控制ATP合成，調節脂肪酸代謝、控制活性氧的產生等密切相關的基因，其核苷酸序列與牛的UCP2蛋白核酸序列NM_001033611.1具有92%的相似性。

本發明的技術方案之一是通過以下措施來實現的：一種雙峰駝UCP2蛋白基因，其特征在于該基因具有SEQ?ID?NO.1中從核苷酸第59-1852位的核苷酸序列，其同牛UCP2基因蛋白編碼序列同源性為92.00%，編碼氨基酸序列同源性為95.00%。

本發明的技術方案之二是通過以下措施來實現的：一種雙峰駝UCP2蛋白基因的重組蛋白。

下面是對上述發明技術方案的進一步優化或/和改進：

上述重組蛋白具有SEQ?ID?NO.?1所示的氨基酸序列的多肽、或其保守性變異多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

上述重組蛋白的氨基酸序列為SEQ?ID?NO.2。

上述重組蛋白通過設計一對引物從雙峰駝UCP2蛋白中得到雙峰駝UCP2蛋白基因，該引物對的核苷酸序列正向引物為SEQ?ID?NO.3和反向引物為SEQ?ID?NO.4，其序列信息如下：

SEQ?ID?NO.3：5’-?ATGGTTGGACTGAAGCCTTCA-3’，

SEQ?ID?NO.4：Oligo?dT。