[發(fā)明專利]雙峰駝過氧化氫酶蛋白基因、重組蛋白及其克隆方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210478252.6
• 申請日: 2012-11-22
• 公開（公告）號: CN103014026A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳鋼糧
• 申請（專利權(quán)）人: 新疆旺源駝奶實(shí)業(yè)有限公司
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N9/08;C12N15/10
• 代理公司: 烏魯木齊合縱專利商標(biāo)事務(wù)所 65105
• 代理人: 湯潔

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域，是一種雙峰駝過氧化氫酶蛋白基因、重組蛋白及其克隆方法。

背景技術(shù)

過氧化氫酶（catalase），是催化過氧化氫分解成氧和水的酶，存在于細(xì)胞的過氧化物體內(nèi)。過氧化氫酶是過氧化物酶體的標(biāo)志酶,?約占過氧化物酶體酶總量的40%。過氧化氫酶存在于所有已知的動物的各個組織中，特別在肝臟中以高濃度存在。CAT是紅血素酶，不同的來源有不同的結(jié)構(gòu)。在不同的組織中其活性水平高低不同。過氧化氫在肝臟中分解速度比在腦或心臟等器官快，就是因?yàn)楦沃械腃AT含量水平高。

作為一種物質(zhì)，過氧化氫酶是在1811年被過氧化氫（H2O2）的發(fā)現(xiàn)者泰納爾（Louis?Jacques?Thénard）首次發(fā)現(xiàn)。1900年，Oscar?Loew將這種能夠降解過氧化氫的酶命名為“catalase”，即過氧化氫酶，并發(fā)現(xiàn)這種酶存在于許多植物和動物中。1937年，詹姆斯·B·薩姆納將來自牛肝中的過氧化氫酶結(jié)晶，并在次年獲得了該酶的分子量。1969年，牛的過氧化氫酶的氨基酸序列得以解出。而后，1981年，其三維結(jié)構(gòu)得以解析。

過氧化氫是一種代謝過程中產(chǎn)生的廢物，它能夠?qū)C(jī)體造成損害。為了避免這種損害，過氧化氫必須被快速地轉(zhuǎn)化為其他無害或毒性較小的物質(zhì)。而過氧化氫酶就是常常被細(xì)胞用來催化過氧化氫分解的工具。駱駝可以適應(yīng)干旱荒漠惡劣環(huán)境，其機(jī)體的代謝過程會有其獨(dú)特性來適應(yīng)沙漠中的缺水、極度的干旱、較高的地表溫度、食物極度稀疏等惡劣的沙漠環(huán)境，而駱駝在極度的環(huán)境中產(chǎn)生的代謝廢物過氧化氫也需要過氧化氫酶的代謝，所以研究駱駝的過氧化氫酶有非常重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明雙峰駝過氧化氫酶蛋白基因是一種存在于細(xì)胞的過氧化物體內(nèi)催化過氧化氫分解成氧和水的酶的基因，與駱駝的能適應(yīng)沙漠中的惡劣環(huán)境，進(jìn)行過氧化氫的代謝調(diào)節(jié)有很大關(guān)系，是非常重要的一種酶。

本發(fā)明的技術(shù)方案之一是通過以下措施來實(shí)現(xiàn)的：一種雙峰駝過氧化氫酶蛋白基因，該基因是一種存在于細(xì)胞的過氧化物體內(nèi)催化過氧化氫分解成氧和水的酶的基因，具有SEQ?ID?NO.1中從核苷酸第29-1580位的核苷酸序列。

本發(fā)明的技術(shù)方案之二是通過以下措施來實(shí)現(xiàn)的：一種雙峰駝過氧化氫酶蛋白基因的重組蛋白。

下面是對上述發(fā)明技術(shù)方案之二的進(jìn)一步優(yōu)化或/和改進(jìn)：

上述重組蛋白的核苷酸序列為SEQ?ID?NO.1。

上述重組蛋白為SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列的多肽、或其保守性變異多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。

上述重組蛋白的氨基酸序列為SEQ?ID?NO.2。

上述重組蛋白通過設(shè)計(jì)一對引物從雙峰駝過氧化氫酶蛋白中得到雙峰駝過氧化氫酶蛋白基因，該引物對的核苷酸序列正向引物為SEQ?ID?NO:?3和反向引物為SEQ?ID?NO:?4，其序列信息如下：

SEQ?ID?NO.3：5’-?CCAGGCGTCGCACTTGTAC?-3’，

SEQ?ID?NO.4：5’-?TGGAAAACGTCGCCATAGC?-3’。

本發(fā)明的技術(shù)方案之三是通過以下措施來實(shí)現(xiàn)的：一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙峰駝過氧化氫酶蛋白基因的克隆方法，其特征在于按下述步驟進(jìn)行：第一步，組織分離(Isolation)；第二步，總RNA的分離(Total?RNA?isolation)，總RNA的分離(Total?RNA?isolation)包括提取RNA的準(zhǔn)備工作、組織總RNA提取、組織總RNA的鑒定；第三步，全長cDNA的克隆(Cloning?of?Full-length?cDNA)，全長cDNA的克隆(Cloning?of?Full-length?cDNA)包括引物設(shè)計(jì)及合成、RT-PCR擴(kuò)增、克隆和測序，該引物對的核苷酸序列正向引物為SEQ?ID?NO:?3和反向引物為SEQ?ID?NO:?4，其序列信息如下：

SEQ?ID?NO.3：5’-?CCAGGCGTCGCACTTGTAC?-3’，

SEQ?ID?NO.4：5’-?TGGAAAACGTCGCCATAGC?-3’。