[發明專利]一種阿維菌素產生菌及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201210477320.7
• 申請日: 2012-11-21
• 公開（公告）號: CN103834605B
• 公開（公告）日: 2018-09-21
• 發明（設計）人: 劉文;趙群飛
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海有機化學研究所;中國科學院上海有機化學研究所湖州生物制造創新中心
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P19/62;C12N15/76;C12R1/465
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 祝蓮君;雷芳

1.一種阿維菌素產生菌，其特征在于，所述產生菌具有以下特征：

(a)所述產生菌的基因組中的aveD基因被失活、或aveD基因功能喪失、或aveD基因缺失、或不表達aveD基因、或不表達AveD蛋白、或表達的AveD蛋白無功能；

(b)所述產生菌的基因組中aveC基因被失活、或aveC基因功能喪失、或aveC基因缺失；或不表達aveC基因、或不表達AveC蛋白、或AveC蛋白無功能；

(c)所述產生菌的基因組中含有或表達aveC的同源基因；且所述的aveC的同源基因為梅嶺霉素(meilingmycin)生物合成基因meiC；和

(d)所述的產生菌的發酵產物中，阿維菌素B2a組分的相對含量滿足式I：

B/A≥35％

式I

其中，

B為發酵產物中阿維菌素B2a組分的質量；

A為發酵產物中所有阿維菌素組分總的質量；

并且，所述的產生菌為除蟲鏈霉菌(Streptomyces avermectinius)。

2.如權利要求1所述的阿維菌素產生菌，其特征在于，所述B/A≥40％。

3.如權利要求1所述的阿維菌素產生菌，其特征在于，所述B/A≥95％。

4.如權利要求1所述的阿維菌素產生菌，其特征在于，所述AveD蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

5.如權利要求1所述的阿維菌素產生菌，其特征在于，所述AveC蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

6.如權利要求1所述的阿維菌素產生菌，其特征在于，所述的meiC基因來源于南昌鏈霉菌(Streptomyces nanchangensis)。

7.如權利要求1所述的阿維菌素產生菌，其特征在于，所述的梅嶺霉素(meilingmycin)生物合成基因meiC編碼的蛋白質序列如SEQ ID NO：3所示。

8.如權利要求1所述的阿維菌素產生菌，其特征在于，所述的生產菌是除蟲鏈霉菌(Streptomyces avermectinius)mVL1003，保藏編號為CGMCC No.6678。

9.權利要求1中所述的阿維菌素產生菌的用途，其特征在于，它被用做發酵生產阿維菌素B2a組分的工程菌。

10.一種制備阿維菌素B2a組分的方法，其特征在于，包括步驟：

(a)培養權利要求1所述的阿維菌素產生菌，從而獲得含有阿維菌素B2a的發酵產物；和

(b)從發酵產物中分離出所述的阿維菌素B2a組分。

11.一種生產阿維菌素B1a組分的方法，其特征在于，包括步驟：

(a)培養權利要求1所述的阿維菌素產生菌，從而獲得含有阿維菌素B2a組分的發酵產物；

(b)從發酵產物中分離出所述的阿維菌素B2a組分；和

(c)將分離的阿維菌素B2a轉化為阿維菌素B1a組分。

12.如權利要求11所述的方法，其特征在于，步驟(c)所述轉化是將B2a組分高溫水解，從而獲得B1a組分。

13.一種生產伊維菌素的方法，其特征在于，包括步驟：

(a)培養權利要求1所述的阿維菌素產生菌，從而獲得含有阿維菌素B2a組分的發酵產物；

(b)從發酵產物中分離出所述的阿維菌素B2a組分；和

(c)將分離的阿維菌素B2a組分轉化為伊維菌素。

14.如權利要求13所述的方法，其特征在于，步驟(c)所述轉化是用三-正-丁基氫化錫對阿維菌素B2a進行還原和脫保護，獲得伊維菌素。