[發(fā)明專利]一種昆蟲中腸細(xì)胞的分離及離體培養(yǎng)方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210475498.8
• 申請日: 2012-11-19
• 公開（公告）號: CN102911908A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李長友;鄭桂玲;周洪旭;吳艷蕾;童丹丹
• 申請（專利權(quán)）人: 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N5/07
• 分類號: C12N5/07
• 代理公司: 青島海昊知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所有限公司 37201
• 代理人: 曾慶國

1.一種家蠶幼蟲中腸細(xì)胞的分離方法，其特征在于，所述的分離方法是將分離的中腸組織用Dispase?Ⅱ酶進(jìn)行酶解，酶解結(jié)束后，吹打酶解后的中腸組織，并將酶解液進(jìn)行過濾以除去中腸底膜組織，將收集的細(xì)胞濾液離心棄去上清，即獲得分離的家蠶幼蟲的中腸細(xì)胞。

2.如權(quán)利要求1所述的分離方法，其特征在于所述的酶解條件如下：DispaseⅡ酶在LPS緩沖液中的濃度為1mg/mL，28℃條件下靜置處理30min完成酶解。

3.如權(quán)利要求2所述的分離方法，其特征在于所述的LPS緩沖液的組成如下：178mmol/L的NaCl、4.3mmol/L的KCl、4.3mmol/L的CaCl₂、3.8mmol/L的NaHCO₃、100mg/L的慶大霉素、2.5mg/L的兩性霉素B；pH為6.5。

4.如權(quán)利要求1所述的分離方法，其特征在于所述的酶解液進(jìn)行過濾，是用孔徑為100μm的過濾網(wǎng)進(jìn)行過濾。

5.一種家蠶幼蟲的中腸細(xì)胞的離體培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的離體培養(yǎng)方法是將分離的家蠶幼蟲中腸細(xì)胞懸浮于添加有條件培養(yǎng)基和胎牛血清的TNM-FH培養(yǎng)基中，在25～30℃下培養(yǎng)來保持活性；所述的條件培養(yǎng)基的制備方法如下：將家蠶胚胎細(xì)胞系Bm-Em-1在添加有胎牛血清的TNM-FH培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數(shù)生長期后，將培養(yǎng)上清液經(jīng)濾膜過濾后的濾液即為條件培養(yǎng)基。

6.如權(quán)利要求5所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述的條件培養(yǎng)基在TNM-FH培養(yǎng)基中添加的濃度為20％。