[發(fā)明專(zhuān)利]一種促腐堆肥復(fù)合發(fā)酵菌劑的制備方法無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201210475310.X | 申請(qǐng)日： | 2012-11-22 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN102943059A | 公開(kāi)（公告）日： | 2013-02-27 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 劉金榮;謝曉蓉;楊鐵順;楊有俊;張旭;李春杰;劉照輝;劉譯諧;孫煜 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 蘭州大學(xué) |
| 主分類(lèi)號(hào)： | C12N1/20 | 分類(lèi)號(hào)： | C12N1/20;C05F17/00;C12R1/07 |
| 代理公司： | 暫無(wú)信息 | 代理人： | 暫無(wú)信息 |
| 地址： | 730099 甘肅*** | 國(guó)省代碼： | 甘肅;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 堆肥 復(fù)合 發(fā)酵 制備 方法 | ||
1.一種促腐堆肥復(fù)合發(fā)酵菌劑的制備方法，其特征在于：該方法分別使用土著菌、嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillus?stearothermophilus)，該菌種購(gòu)自中普通微生物保藏管理中心，保藏編號(hào)為CGMCC1.1866，經(jīng)過(guò)如下培養(yǎng)步驟：?
第一步驟：通過(guò)土著菌的采集、擴(kuò)大培養(yǎng)制得固體土著菌菌劑；?
第二步驟：通過(guò)嗜熱脂肪芽孢桿菌的固體斜面培養(yǎng)、擴(kuò)大培養(yǎng)、發(fā)酵罐中通氣培養(yǎng)制成嗜熱脂肪芽孢桿菌固體菌劑；?
第三步驟：將上述制得的固體土著菌菌劑和嗜熱脂肪芽孢桿菌固體菌劑按重量比2-3∶1的比例混合制成促腐堆肥復(fù)合發(fā)酵菌劑。?
所述土著菌的采集是取若干千克夾生大米飯裝入干凈木箱、蓋上宣紙、密閉木箱端口、木箱部分埋入菜地，讓周邊的土著菌潛入到米飯中，最終在米飯上形成土著菌菌落；所述土著菌的擴(kuò)大培養(yǎng)是將帶土著菌菌落的米飯和紅糖按照重量比2-3∶1的比例混合均勻裝入壇子封口放置直至成濃稠液體狀態(tài)，再按照重量比1∶1的比例摻入混合經(jīng)過(guò)高溫消毒的麩皮，發(fā)酵后風(fēng)干處理；?
所述嗜熱脂肪芽孢桿菌固體斜面培養(yǎng)所需的斜面培養(yǎng)基液的配方為8-12g蛋白胨、2-5g牛肉提取物、4-6g氯化鈉、14-16g瓊脂、1L蒸餾水；所述嗜熱脂肪芽孢桿菌擴(kuò)大培養(yǎng)所需的種子培養(yǎng)液的配方為8-12g蛋白胨、2-5g牛肉提取物、4-6g氯化鈉、1L蒸餾水；所述嗜熱脂肪芽孢桿菌在發(fā)酵罐中通氣培養(yǎng)即將擴(kuò)大培養(yǎng)后嗜熱脂肪芽孢桿菌以4％-6％(V/V)的接種量接種至裝有培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，將培養(yǎng)好的嗜熱脂肪芽孢桿菌液按照重量比1∶1的比例將之接種到滅菌麩皮中，然后放回發(fā)酵罐中繼續(xù)通氣培養(yǎng)發(fā)酵36-48h后風(fēng)干處理。?
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述斜面培養(yǎng)基液的配方為10g蛋白胨、3g牛肉提取物、5g氯化鈉、15g瓊脂、1L蒸餾水；所述嗜熱脂肪芽孢桿菌擴(kuò)大培養(yǎng)所需的種子培養(yǎng)液的配方為10g蛋白胨、3g牛肉提取物、5g氯化鈉、1L蒸餾水。?
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述帶土著菌菌落的米飯和紅糖混合均勻裝入壇子封口放置的溫度為18℃-22℃，放置時(shí)間為7-10天。?
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述嗜熱脂肪芽孢桿菌?的固體斜面培養(yǎng)的培養(yǎng)溫度為40-50℃，培養(yǎng)時(shí)間16-24小時(shí)。?
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述將嗜熱脂肪芽孢桿菌從保藏的固體斜面培養(yǎng)基上接種至種子培養(yǎng)液中擴(kuò)大培養(yǎng)的操作步驟為：在1000ml的三角瓶裝入種子培養(yǎng)液200ml，在55℃下以旋轉(zhuǎn)搖床設(shè)定轉(zhuǎn)速160-240rpm，培養(yǎng)24-36小時(shí)，培養(yǎng)后的液體菌種采用菌落計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)，菌數(shù)含量達(dá)到1×109個(gè)/ml以上。?
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于：所述旋轉(zhuǎn)搖床設(shè)定轉(zhuǎn)速200rpm，培養(yǎng)30小時(shí)。?
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述發(fā)酵罐中通氣培養(yǎng)的培養(yǎng)溫度為55-65℃，攪拌轉(zhuǎn)速為30-60rpm，通氣量為0.6-1.2m3/h，培養(yǎng)時(shí)間為22-28小時(shí)。?
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于：所述培養(yǎng)溫度為60℃，攪拌轉(zhuǎn)速為45rpm，通氣量為0.9m3/h，培養(yǎng)時(shí)間為24小時(shí)。?
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