[發(fā)明專利]一種川芎種質(zhì)的離體保存方法及川芎離體保存培養(yǎng)基

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210475218.3
• 申請日: 2012-11-21
• 公開（公告）號: CN103210904A
• 公開（公告）日: 2013-07-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蔣桂華;馬逾英;張俊;唐琳;梅蘭菊;朱玲玲;陳佳妮
• 申請（專利權(quán)）人: 成都中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號: A01N3/00
• 分類號: A01N3/00
• 代理公司: 成都高遠知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明屬于栽培領(lǐng)域，涉及一種川芎種質(zhì)的離體保存方法及川芎離體保存培養(yǎng)基。?

背景技術(shù)

川芎為傘形科植物川芎Ligusticum?chuanxiong?Hort.的根莖，為我國的傳統(tǒng)中藥，也是著名的川產(chǎn)道地藥材，具有近兩千年的栽培和使用歷史。歷代醫(yī)家均作為治頭痛、活血行氣、祛風止痛藥使用。2005版《中國藥典》一部中收載的成方制劑和單味制劑共564種，其中使用川芎的有85種，約占藥典收載中成藥的15%。在2010年版《中國藥典》收載的1039個成方制劑和單味制劑中，含川芎的有155個，占所載成方制劑總數(shù)的14.92%。兩版藥典使用川芎的收載處方增加了82.35%，說明川芎使用量和需求量在不斷提高。現(xiàn)代臨床上主要用于治療心腦血管系統(tǒng)的疾病，效果顯著，如“速效救心丸”等。川芎除供藥用外，還用于保健品、美容化妝品、飼料添加劑、煙用香料添加劑及天然防腐劑等，國內(nèi)外市場需求量大。?

川芎是無性繁殖，生產(chǎn)上用膨大的地上莖節(jié)（苓種或芎苓子）作為繁殖材料。長期以來，川芎種植基本處于自發(fā)狀態(tài)，苓種繁育仍然停留在自繁自用，缺乏統(tǒng)一的生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程和科學(xué)的組織管理，且沒有苓種分級標準和檢驗規(guī)程，導(dǎo)致川芎苓種質(zhì)量良莠不齊，使產(chǎn)區(qū)川芎藥材的產(chǎn)量和質(zhì)量受到極大影響。經(jīng)過上千年的栽種，加上缺乏選種育種，存在一定程度的種質(zhì)退化。?

蔣桂華等，“川芎種質(zhì)資源的調(diào)查收集與保存研究”，中草藥，2008年4月第39卷第4期與高農(nóng)等，“川芎苓子繁育技術(shù)”，藥用植物·特種經(jīng)濟動植物2004年第10期均報道了的川芎種質(zhì)的保存方法，但均為傳統(tǒng)的田間保存方法，存在耗費人力物力，容易損失，成本高，保存效果不佳等缺點。?

發(fā)明內(nèi)容?

為了克服上述缺陷，本發(fā)明提供了一種川芎種質(zhì)的離體保存方法其離體保存培養(yǎng)基。?

本發(fā)明川芎種質(zhì)的離體保存方法，它包括如下步驟：?

（1）取川芎莖尖，消毒滅菌；?

（2）將步驟（1）處理后的川芎莖尖接種于川芎離體保存培養(yǎng)基中保存，保存條件為：溫度4~25℃，光照強度600~1500lx，光照時間10~14h/d；所述?保存培養(yǎng)基以1/2MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加20~30g/L蔗糖，或者以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加20~60g/L蔗糖。?

其中，所述步驟（1）包括如下步驟：?

1）消毒：取川芎莖尖，用消毒粉消毒其表面；?

2）滅菌：取步驟1）處理后的川芎莖尖，用70%乙醇滅菌30s，再用HgCl₂滅菌2~5min，或者先用70%乙醇滅菌15s，再用HgCl₂滅菌5min。?

其中，步驟（2）所述保存培養(yǎng)基以1/2MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加20g/L蔗糖，或者以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加40g/L蔗糖。?

其中，步驟（2）所述保存培養(yǎng)基中含有植物生長抑制劑。?

植物生長抑制劑：是抑制或破壞植物頂端分生組織的分裂與膨大的一類化學(xué)物質(zhì)，它能延緩細胞分裂和伸長，達到控制部分生長、刺激花芽分化、延緩衰老等目的。?

所述植物生長抑制劑為多效唑、矮壯素、烯效唑或者青鮮素。?

優(yōu)選地，所述多效唑的濃度不低于0.5mg/L；所述矮壯素的濃度為0~40mg/L。進一步優(yōu)選地，所述多效唑的濃度為0.5mg/L；所述矮壯素的濃度為40mg/L。?

其中，步驟（2）所述保存條件為：溫度為25℃，光照強度為800lx，光照時間為12h/d。?

本發(fā)明川芎離體保存培養(yǎng)基，它以1/2MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加20~30g/L蔗糖，或者以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加20~60g/L蔗糖。?

其中，所述保存培養(yǎng)基以1/2MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加20g/L蔗糖，或者以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加40g/L蔗糖。?

其中，所述保存培養(yǎng)基中還添加有植物生長抑制劑。所述植物生長抑制劑為多效唑、矮壯素、烯效唑或者青鮮素。?

優(yōu)選地，所述多效唑的濃度不低于0.5mg/L；所述矮壯素的濃度為0~40mg/L。進一步優(yōu)選地，所述多效唑的濃度為0.5mg/L；所述矮壯素的濃度為40mg/L。?

本發(fā)明保存方法實現(xiàn)了離體保存川芎種質(zhì)，操作方便，成本低廉，可以保證川芎的遺傳穩(wěn)定性，從而保留優(yōu)質(zhì)的川芎資源，具有良好的市場應(yīng)用前景。?

顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。?