[發明專利]抗Cry1Ac毒素單鏈抗體的編碼基因及免疫PCR檢測方法

無效

• 申請號: 201210474694.3
• 申請日: 2012-11-21
• 公開（公告）號: CN102936598A
• 公開（公告）日: 2013-02-20
• 發明（設計）人: 王耘;劉賢金;張存政;劉媛;王淮慶
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C12N15/13
• 分類號: C12N15/13;C07K16/12;G01N33/68;C12Q1/68
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237
• 代理人: 程化銘

1.一種抗Cry1Ac毒素的單鏈抗體的編碼基因，其特征在于：所述的單鏈抗體的編碼基因為如下1）、2）、3）所示：

1）其核酸序列是序列表中SEQ?ID?No.1所示的DNA分子；

2）與1）限定的DNA序列雜交并編碼所述單鏈抗體的DNA分子；

3）與序列表中SEQ?ID?No.1自5’端起第27-821位核酸具有90%以上的同源性且編碼所述抗Cry1Ac毒素單鏈抗體的DNA分子。

2.根據權利要求1所述編碼基因翻譯的氨基酸序列如序列表中SEQ?ID?No.2所示及對應的活性多肽。

3.一種制備權利要求2所述的活性多肽，是將權利要求1的編碼基因與噬菌粒載體拼接并導入表達宿主菌培養獲得。

4.一種Cry1Ac毒素的免疫PCR檢測方法，其特征在于：檢測抗體為權利要求3所述的活性多肽；檢測DNA為權利要求1所述的編碼核酸序列。

5.根據權利要求4所述的Cry1Ac毒素的免疫PCR檢測方法，其特征在于，其包括下列步驟：

A、PCR管預處理

采用戊二醛溫育法處理聚乙烯PCR管；

?B、優化融合型單鏈抗體添加量；

融合型單鏈抗體以10⁸?pfu/mL為添加濃度；

?C、免疫-PCR步驟

1）加入50?μL包被抗原Cry1Ac；

2）洗滌，加入封閉液；

3）洗滌，加入融合型單鏈抗體上清液；

4）洗滌；

5）進行PCR檢測。

6.根據權利要求5所述的Cry1Ac毒素的免疫PCR檢測方法，其特征在于：免疫-PCR檢測是指定性或定量檢測，其中：定性檢測是：瓊脂糖凝膠電泳檢測取2μL產物上樣，電泳25?min，UV檢測；定量檢測是：在上游引物5’修飾FAM熒光基團，經PCR擴增，回收產物在黑色96孔板中用多功能微孔板測定儀檢測，激發波長為485?nm，發射波長為535?nm。