[發明專利]一種珠芽類魔芋組織培養快繁方法

無效

• 申請號: 201210474433.1
• 申請日: 2012-11-21
• 公開（公告）號: CN102939902A
• 公開（公告）日: 2013-02-27
• 發明（設計）人: 趙建榮;余磊
• 申請（專利權）人: 昆明學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明今威專利商標代理有限公司 53115
• 代理人: 楊宏珍

技術領域：

本發明涉及一種珠芽類魔芋組織培養繁殖方法，屬于植物細胞工程技術領域。

背景技術：

魔芋是天南星科（Araceae）魔芋屬（Amorphophallus）多年生草本植物，是迄今發現的唯一能大量合成葡甘聚糖（konjac?glucomannan,KGM）的植物種群，主要分布在亞洲和非洲的熱帶及亞熱帶地區，僅少數亞洲國家有栽培，中國、日本較普遍。它是我國西南地區重要的特色經濟作物，已有兩千多年的栽培和食用歷史，其主要成分葡甘聚糖是優異的純天然膳食纖維，具極高的經濟價值，已在食品、保健品、醫藥、化工、石油、紡織等領域得到廣泛應用，帶動了一大批相關產業的發展，其開發利用已顯現出經濟效益高、社會效益明顯、生態效益好的優勢。隨著市場需求急劇增加，魔芋種植業得到了迅猛發展，現已成為西南山區農民脫貧致富的一條重要途徑。

珠芽類魔芋是一類繁殖方式獨特的野生馴化魔芋種，因其地上植株會產生無性繁殖的“珠芽”小球莖而得名，這樣就顯著增加了珠芽魔芋的繁殖系數，是一種獨特的魔芋種質資源，目前珠芽類魔芋品種：“紅魔芋”在云南德宏州、西雙版納州及附近地區有大量種植。而金魔芋是在云南西雙版納州熱帶雨林中新發現的一個特有珠芽魔芋類品種，其葡甘聚糖含量遠高于花魔芋、白魔芋及其它珠芽類魔芋品種如紅魔芋等，具有很好的加工價值，并高抗魔芋軟腐病和白絹病等魔芋生產中的主要病害，是不可多得的種質資源。

但目前在金魔芋栽培中還是存在用種量大，種球繁殖系數較低，且切塊繁殖易于傳播魔芋病害，種子量少、變異較低的缺點，隨著魔芋產業的發展，十分迫切需要大量的優質魔芋種苗。雖然在實驗室條件下，已經有通過組織培養繁殖珠芽魔芋（指紅魔芋品種）的繁育方法(吳金平等,?珠芽類魔芋的組織培養與快速繁殖,植物生理學報?2007,(5)2:887-888?和龍春林等，珠芽摩芋種苗繁育方法,專利公開號1596618?)，但尚未有對金魔芋品種組織快繁技術的相關研究。并且，上述此法存在對珠芽魔芋（紅魔芋）快繁需要進行生根、煉苗、移栽等多步程序，獲得珠芽魔芋種球的周期長，生長慢、不耐儲藏和運輸的不足。

發明內容：

本發明的目的在于克服現有技術之不足，而提供一種珠芽類魔芋組織培養快繁方法。

本發明通過組培技術，改變外植體的誘導發育、生長途徑，通過添加相應的生長調節物質，引導生長發育途徑由器官發生途徑轉向胚狀體發生途徑，直接通過離體培養獲得大量成熟的珠芽魔芋（包括金魔芋和其它珠芽類魔芋品種，如紅魔芋）種球，用于播種進一步生長膨大，來收獲并提高珠芽魔芋產量。

本發明的珠芽類魔芋組織培養快繁方法，包括菌苗培養、胚狀體誘導、種球誘導、種球成熟培養步驟，具體如下：

?(1)無菌苗培養：將珠芽類魔芋植株的幼嫩葉片、葉柄以及叢生芽常規滅菌后，將葉片切成0.5-1.0cm²，葉柄切成0.8-1cm長，接種到常規滅菌的苗培養基上，在2000lux光下培養，11h/d，培養溫度28±1℃，得到脫毒無菌苗；苗培養基組分及配比為：MS基本培養基+0.2mg/L?NAA?+0.5mg/L?6-BA+活性炭0-3.0g/L，蔗糖30g/L，瓊脂6-8g/L，調pH至5.8-6.2；

(2)胚狀體誘導：將步驟(1)獲得的脫毒無菌苗，取葉片切成0.5-1.0cm²，葉柄切成0.8-1.0cm，接到常規滅菌的胚狀體誘導培養基上，在2000lux光下培養，11h/d，培養溫度28±1℃，獲得珠芽類魔芋胚狀體；胚狀體誘導培養基組分及配比為：MS基本培養基+0.2mg/L?NAA?+0.5mg/L?6-BA?+0.1mg/L?IAA+0.1-0.2mg/L?ABA+30g/L聚乙二醇，蔗糖30g/L，瓊脂6-8g/L，調pH至5.8-6.2，或MS基本培養基+0.2mg/L?NAA?+0.5mg/L?6-BA，蔗糖30g/L，瓊脂6-8g/L，調pH至5.8-6.2；

(3)種球誘導：將未產生新芽之前的珠芽類魔芋胚狀體，轉移至常規滅菌的誘導培養基上，在2000lux光下培養，11h/d，培養溫度28±1℃，得到珠芽類魔芋幼小種球；種球誘導培養基的組分及配比為：MS基本培養基+0.1mg/L?NAA?+3.0g/L活性炭+15g/L聚乙二醇，蔗糖30g/L，瓊脂6-8g/L，調pH至5.8-6.2；???????