[發明專利]結核桿菌Acr蛋白的抗體及其編碼基因與應用

無效

• 申請號: 201210474347.0
• 申請日: 2012-11-20
• 公開（公告）號: CN103130891A
• 公開（公告）日: 2013-06-05
• 發明（設計）人: 童貽剛;周麗君;馮福民;安小平;米志強;王曉娜
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物流行病研究所
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;C12N15/11;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;G01N33/569;C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種結核桿菌Acr蛋白的抗體及其編碼基因與應用。

背景技術

結核病一直是人們關注的一個全球性健康問題,潛伏感染和耐藥性是結核病治療的兩大難題,開發新型全人源抗體藥物能很好的解決目前遇到的兩大難題，具有重大的意義。

潛伏感染和耐藥性是結核病治療的兩大難題：MTB潛伏感染（latenttuberculosisinfection，LTBI）是一種亞臨床狀態，此時細菌呈休眠狀態。普通人群中約有1/3的人感染結核桿菌，其中約10%的感染者可能發生TB，大多數感染者以潛伏感染形式存在。這種潛伏感染狀態潛伏時間長達數十年，而且具有隨時復發的可能性，并有了可能導致TB爆發。由于潛伏感染人群大，范圍廣，不易診斷，是目前導致TB爆發的一個重要因素。因而MTB潛伏感染的預防和治療成為TB的控制與根除的關鍵環節。

結核桿菌晶體蛋白（Alpha?Crystalin，Acr）是結核桿菌在休眠期和缺氧狀態下產生的主要蛋白，為結核桿菌在巨噬細胞內持續存在所必需。Acr蛋白上的甲硫酰胺殘基能發生可逆的磺化氧化和去磺化氧化作用，借此清除存在于巨噬細胞中的活性氧和活性氮，從而保護MTB的細胞膜和其他成分不受損傷，最終得以在宿主體內存活。當MTB被巨噬細胞吞噬后，為了能在巨噬細胞內生存和生長，MTB許多蛋白的表達都上調，其中Acr的表達活性就增至原來的80倍。有研究結果表明，Acr基因的缺失使MTB在小鼠和巨噬細胞中生長加快，菌落計數發現突變株的細菌數增至野生型的10倍，說明Acr與MTB進入休眠狀態密切相關。體外實驗也表明，Acr不但能顯著減慢小鼠巨噬細胞內結核桿菌的生長速度，而且在結核病患者及潛伏感染者體內存在針對Acr的特異性T細胞和B細胞免疫應答。大量實驗數據表明，Acr蛋白是結核分枝桿菌潛伏感染期機體免疫反應的重要靶抗原，對MTB進入休眠狀態及MTB休眠菌在體內的存活起著重要的作用。

人類的結核病病例大部分是復發性病例。因此，新型結核病疫苗含有的抗原應是MTB在宿主體內長期存在時(休眠期或潛伏期)大量聚集的靶分子，例如Acr蛋白，理論上這種抗原誘導的免疫反應能夠抑制潛伏狀態的MTB。如果將該抗原作為疫苗的靶抗原應用，可能會有效防治潛伏性感染結核病的發生。

目前應用的抗結核藥物主要是1945～1966年通過傳統隨機篩檢得到的，近些年來新增了一些新型利福平類藥物(利福布汀、利福噴汀、KRM-1648等)和新型喹諾酮類藥物(左旋氧氟沙星、氧氟沙星、司帕沙星、moxi-floxacin等),這些藥物僅能針對活動期肺結核，而對于潛伏性感染者（約占全部感染者的90%）不起作用，而且隨著耐藥菌株和多重耐藥菌株的日益嚴重，亟需研制出新方法來預防和控制該種疾病，針對休眠期蛋白Acr篩選出的全人源的抗體藥物可能解決目前形勢下的兩大難題（即潛伏感染和耐藥性）。

發明內容

本發明的目的是提供結核桿菌Acr蛋白的抗體及其編碼基因。

本發明提供的多肽，為結核桿菌Acr蛋白抗體，為如下1）-15）中的任意一種：

1）由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的多肽；2）由序列表中序列4所示的氨基酸序列組成的多肽；3）由序列表中序列6所示的氨基酸序列組成的多肽；4）由序列表中序列8所示的氨基酸序列組成的多肽；5）由序列表中序列10所示的氨基酸序列組成的多肽；6）由序列表中序列12所示的氨基酸序列組成的多肽；7）由序列表中序列14所示的氨基酸序列組成的多肽；8）由序列表中序列16所示的氨基酸序列組成的多肽；9）由序列表中序列18所示的氨基酸序列組成的多肽；10）由序列表中序列20所示的氨基酸序列組成的多肽；11）由序列表中序列22所示的氨基酸序列組成的多肽；12）由序列表中序列24所示的氨基酸序列組成的多肽；13）由序列表中序列26所示的氨基酸序列組成的多肽；14）由序列表中序列28所示的氨基酸序列組成的多肽；15）將1）-14）中任一所示多肽的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有同樣功能的由1）-14）中任一所示多肽衍生的多肽。

上述一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加為不超過10個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加。

編碼上述多肽的基因也是本發明保護的范圍。